摘要:植酸酶是一种新型的、可作为动物饲料添加剂的重要酶制剂，它对提高饲料中磷的利用率，提高动物的生产性能，以及减轻因动物高磷粪便所导致的环境水域的磷污染有着重要意义。本文综述了植酸酶的分子生物学及基因工程研究的最新进展，讨论了其进一步的研究发展方向。

摘要:采用RT-PCR技术从人肝总RNA中分离扩增了0.45kb的人铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn SOD)基因的cDNA序列，首先克隆至大肠杆菌表达质粒pET23b,进行了序列测定和超高表达。将Cu/Zn SOD cDNA亚克隆至乳酸乳球菌表达载体pMG36e，用电穿孔法将重组质粒pMG36esod转化到乳酸乳球菌中，获得Cu/Zn SOD的组成型表达，其表达量约占乳酸乳球菌可溶性蛋白的5%以上，活性染色表明该工程菌表达的Cu/Zn SOD具有较好的酶活性。

摘要:将乙肝病毒融合表面抗原基因SA-28的单倍体酵母工程菌Y19/YFD158和与其不同接合型的单倍体酵母菌Y95接合，筛选到二倍体酵母工程菌Y95xY19/YFD158。对两种工程菌的研究表明：二倍体工程菌发酵密度为单倍体工程菌的3倍；表达质粒在二倍体酵母中的稳定性明显高于单倍体工程菌；二倍体工程菌对融合抗原的表达量为单倍体的3倍以上；表达质粒在二倍体细胞中的平均拷贝数略低于单倍体工程菌。

摘要:将恶性疟原虫MSP1-31基因序列，引入四环素(Tc)控制的真核表达载体pTRE，获得重组质粒pTRE-31。将MSP1-31的原核表达载体pDS56T1转化大肠杆菌表达MSP1-31，亲和纯化后作检测用抗原。pTRE-31与辅助质粒pTet-off(tTA)肌肉注射4周龄BALB/c小鼠，观察DNA介导免疫情况。结果显示，四环素饲喂的小鼠4周时血清抗体阳转率为7.1%(1/14)，而不饲喂四环素组可达100%(14/14)，表明用pTRE-31/pTet-off重组质粒组合直接注射小鼠有效地引发了针对疟原虫MSP1-31抗原的体液免疫反应，且可受控于四环素。不饲喂四环素组小鼠在12周后仍能维持抗体阳性，倍比稀释ELISA显示血清抗体滴度在4周、8周和12周内持续上升。饲喂四环素组小鼠4周后停止饲喂Tc，第8周和第12周检测仍有部分(60%)小鼠血清抗体阳转，而继续饲喂Tc的小鼠未有抗体阳转，暗示重组质粒DNA在小鼠体内可持续存在至少4周并仍具备表达功能。

摘要:外植体类型和光照条件决定沙打旺胚性愈伤组织的形成。用生长10d的胚性愈伤组织可分离到1.2×10⁶个/g(原生质体/细胞)，活力超过80%。当原生质体以1.0×10⁵/mL的植板密度培养在含0.6%琼脂糖附加1.5mg/L 2,4-D、0.5mg/L BA和0.5mol/L葡萄糖的培养基(无机盐降为1/4)中，植板率为16.8%。条件培养基显著促进原生质体的生长发育。长大的细胞克隆经2周4℃低温处理后转到含0.1mg/L NAA和1.0mg/L BA分化培养基上，体细胞胚胎发生频率高达70%，每克细胞产生的体细胞胚数在200个以上。成熟的体细胞胚转到无激素的1/2MS培养基中即分化成苗，再生植株为正常的二倍体。

摘要:用PEG共轭结合猪血红蛋白(pHb)以增大总分子量是延长它在血液循环系统中存留时间的有效方法。作为一种线性的亲水大分子，PEG对pHb的共轭会对它的携氧特性产生显著影响。研究了pHb处于不同空间构象(脱氧的T构象或氧合的R构象)、PEG修饰程度的高低、修饰用PEG的分子量的大小、有无别构效应调节剂等不同条件下PEG修饰对pHb携氧能力的影响。进而又用了PEG修饰已经用双(3,5-二溴水杨酸)延胡索酸酯(DBBF)分子内交联的pHb，考察修饰对这种内交联pHb携氧功能的影响。还比较了4种不同方法活化的PEG衍生物，对pHb修饰效率、对修饰产物携氧功能的影响及修饰产物稳定性等。本文认为，DBBF分子内交联的pHb，在有别构效应调节剂的存在下，再用PEG修饰，可以获得携氧能力好、分子量适宜、四聚体稳定的修饰产物。

摘要:利用氯霉素乙酰转移酶(cat)以及β-半乳糖苷酶(lacZ)基因作为报告基因，从大肠杆菌MC1061株染色体基因组中克隆到3个原核增强子样序列——MC2，MC8，MC9，这3个片段均具有正反向增强活性，对β-半乳糖苷酶基因的增强活性(正向)在2～5.5倍之间。采用体内转录，RNA Dot blot杂交的方法对MC8的功能进行了研究，结果表明，MC8片段对于基因表达的调控发生在转录水平上。用核酸外切酶III末端缺失的方法对MC8的功能区进行了定位。结果显示，MC8的功能区位于距其正向克隆5′端450～950bp长约500bp的区段内。在450～600bp以及840～950bp区段内至少分别含有一个功能位点。序列分析的结果表明，MC8功能区有3个AT丰富区，其中2个分别位于450～600bp以及840～950bp区段内。

摘要:自阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis ATCC31272)中分离出了3种不同类型的菌株，其中只有产灰色孢子的菌株能产生阿维菌素(Avermectins)，摇瓶发酵单位约100μg/mL。经高频电子流诱变和对发酵培养基的改进，选育出Sa-76菌株，其摇瓶发酵单位可达1000μg/mL。从其菌丝体中提取纯化了阿维菌素B₁晶体，其紫外吸收光谱、红外吸收光谱、核磁共振谱(¹HNMR和¹³CNMR)和质谱与国外报道的一致。Sa-76菌株又经2次亚硝基胍诱变，筛选出发酵单位2000μg/mL以上的Sa-76-8菌株。在此基础上，再次用亚硝基胍对Sa-76-8菌株进行了诱变，获得Sa-76-9菌株，结合发酵条件的优化，其发酵单位可高达3500～4000μg/mL。

摘要:在SGI图形工作站上，用同源蛋白结构预测的方法，建立了2株中和性抗hTNFα小鼠单抗(1C₃E₆，3F₆A₁₀)可变区的三维结构模型；并在实验研究2株单抗表位特异性的基础上，根据2株单抗与hTNFα分子表面的形状、静电性、疏水性、氢键等性质，对2株单抗可变区与hTNFα分子的可能结合模式进行了模拟和分析。再根据结合模型，设计并制备了2个hTNFα突变体，然后从实验与计算机模拟两方面着手，对比研究了hTNFα突变前后与两株单抗的结合能力与结合方式的变化。对比研究结果支持了结合模型，该结合模型的建立，为下一步的抗体人源化或小分子化改造等打下了基础。

摘要:用抗性库蚊酯酶基因B1的cDNA片段插入质粒pRL-439中的强启动子之后，再与穿梭表达载体pDC-8相连构建成大肠杆菌蓝藻穿梭表达载体pDC-B1，然后通过三亲接合转移法将pDC-B1转入蓝藻Synechococcus sp. PCC7942中，经新霉素筛选获遗传稳定的转基因藻株；纯化单藻落在液体中扩大培养，提取蓝藻质粒，Southern杂交确证B1cDNA已转入受体细胞；用酯酶的特异性底物β-乙酸萘酯(β-NA)检测B1的表达，转基因藻对β-NA的降解明显高于野生藻，证明酯酶B1基因在转基因藻中得到表达。

摘要:人促红细胞生成素(EPO)是一种调控红系干细胞增殖、分化和成熟的糖蛋白激素。将合成的EPO cDNA插入杆状病毒转移载体pBlueBacⅢ，使其置于Ph基因强启动子控制之下，获得了转移载体pBlueBacEPO。将pBlueBacEPO DNA与野生型BmNPV DNA共转染BmN细胞，经空斑纯化，获插入EPO cDNA的重组病毒rBmNPVEPO。经Sonthern杂交和PCR扩增鉴定证明人EPO基因已正确组建于BmNPV的预定位置。将重组病毒rBmNPVEPO穿刺接种5龄幼虫和蛹，收集感染第3～5d的幼虫血淋巴和3～6.5d蛹血淋巴。用ELISA检测幼虫血淋巴中EPO表达量高达62800u/mL，蛹血淋巴中表达量达74000u/mL。Western blot结果显示幼虫血淋巴和蛹血淋巴均有一条明显的免疫杂交带，分子量均约为26kD。用TF1细胞对幼虫表达产物进行了生物活性测定，每毫升血淋巴中EPO活性约为63000u。

摘要:考察了在半连续灌注培养中WuT₃杂交瘤细胞在不同灌注速率下细胞生长的动态变化，培养基中主要基质的消耗和代谢物的生成。当灌注速率D从1.0/d升高到2.0/d时，乳酸得率系数Y_lac/glu降低18%，氨得率系数Y_amm/gln降低40%，丙氨酸得率系数Y_ala/gln升高58%，甘氨酸得率系数Y_gly/gln基本恒定。说明在灌注速率升高的条件下，细胞会调整代谢机制，丙酮酸和过量的谷氨酸通过转氨作用生成丙氨酸而非甘氨酸。

摘要:研究了微水-有机溶剂两相体系中固定化脂肪酶催化的萘普生甲酯的立体选择性水解反应。固定化酶活性受载体极性、水含量、有机溶剂的logP值、产物抑制的影响，据此构建了一种可以连续拆分产生(S)(+)萘普生的微水-有机溶剂两相体系。反应在一个具有回路的连续流搅拌反应器中进行，反应器中添加有采用吸附法固定化的脂肪酶，载体为一种弱极性的合成载体，水相连同固定化酶颗粒一起永久保持在反应器中，有机流动相带入底物，带出产物。固定化酶在该50mL反应器中30℃连续操作60d，仅损失活性25%，产生(S)(+)萘普生900mg,产物对映体过量值(ee_p)为95%。

摘要:筛选到1株菊粉酶高产克鲁维酵母菌株，采用酵母高密度细胞发酵方法，最高菊粉酶产量达到288.78u/mL,比80～90年代国际上报道的克鲁维酵母菊粉酶最高产量高6.8倍。该酶的菊粉酶/转化酶活性比为1/24.72；菊糖m=13.3mmol/L,蔗糖Km=62.6mmol/L；最适反应pH值为4.4，但在pH3.8～5.6的范围内均保持了较高的活性，相当于最适pH值下活性的90%；最适反应温度为55℃，在50～575℃范围内能够保持较高活性，50℃下酶的半衰期约为16h；外加Mg2+提高酶活性11.28%。

摘要:研究了重组痘苗病毒表达的HIV-1核心蛋白(Gag)p17-p24蛋白的一些生物学及免疫学特点。间接免疫荧光、Dot ELISA及Western blot结果表明，构建的两株重组病毒分别表达了HIV-1 Gag p24及p17-p24融合蛋白。电镜观察证实，Gag p24及p17-24重组蛋白均可形成病毒样粒子。重组病毒可诱导小鼠产生抗HIV-1 Gag p24抗体。重组病毒感染BHK21细胞后，可见由于细胞凋亡而致的染色体DNA断裂“梯子”电泳图。

摘要:采用正相氧化铝柱层析和反相C₁₈柱层析从东北红豆杉培养细胞浸提物中分离纯化了紫杉醇。优化了氧化铝柱层析和反相柱层析的操作条件。实验发现，经过氧化铝柱层析后，测得的紫杉醇量大大增加。经两步层析，使紫杉醇的含量从小于1.0%提高到95%，样品中微量杂质继以重结晶步骤除去，即可获得纯度超过98%的紫杉醇晶体。采用13-CNMR对晶体分析，所得产物结构与文献上紫杉醇的结构一致。

摘要:采用自制的固定化镍离子亚氨二乙酸(IDA)型复合纤维素金属螯合膜色谱对药用人血清白蛋白的进一步纯化进行了研究。考察了Ph对HAS吸附效果的影响。经一步纯化，商品药用HAS中的许多杂蛋白可被除去，经毛细管电泳分析，纯度与Sigma公司的电泳纯HAS相当，回收率可达85%以上。纯化蛋白液中的镍离子经过自制的N，N，N′-三羧甲基乙二胺(TED)型螯合柱处理后可较好地除去。

摘要:研究了蔗糖、KH₂PO₄、NH₄NO₃比对烟草细胞生长和CoQ₁₀量的影响，结果表明，当蔗糖浓度为30g/L时，CoQ₁₀总量最高，此时细胞产量、CoQ₁₀含量和总量分别为19.8g/L、414.7μg/g(dwt)、8212μg/L。在上述蔗糖浓度下，当KH₂PO₄起始浓度为340mg/L、NH₄NO₃为12时，细胞产量、CoQ₁₀含量和总量分别最高，高于此比例时有利于CoQ₁₀形成 ，但不利于细胞生长。

摘要:通过PCR扩增和酶切分别得到抗结肠癌相关抗原抗体的重链可变区序列、轻链可变区序列及连接肽序列，将它们构建成为VHlinkerVL形式的单链抗体基因片段，并在大肠杆菌中进行了表达。SDS-PAGE分析结果表明，以pComb3为载体，在大肠肝菌JM83中，scF_v未获得有效表达，而以pET22b(+)为载体的scFv在大肠杆菌BL21(DE3)中，30℃诱导培养获得了高效表达，表达水平占全菌蛋白的35.5%。

摘要:为探讨一株肝细胞癌特异性鼠源及其人源化单链抗体基因在大肠杆菌中的可溶性表达策略并比较二者对抗原的结合能力，在三种载体中分别以融合、分泌及胞内表达的方式进行了研究，表达产物均以包涵体形式存在；对复性后的单链抗体以细胞ELISA及竞争抑制流式细胞仪法进行检测，表明人源化单链抗体和鼠源单链抗体有相近的抗原结合能力。结论是：在大肠杆菌中表达的基因工程单链抗体的可溶性可能主要由自身氨基酸一级序列决定；先前的设计所采取的人源化方案没有影响到鼠源抗体的CDR的天然构象，表达的人源化单链抗体提供了免疫原性评价及临床应用的基础。

摘要:通过对NK58S和NK58F这一对光敏核不育水稻等位突变系的AFLP分析，比较了AFLP，RAPD及RFLP检测DNA多态性的相对效率。结果表明，这三种分子标记的DNA多态性检出效率依次为AFLP>RAPD>RFLP；找出了水稻AFLP分析的最适反应条件；通过AFLP和集群混合分析(Bulked segregating analysis,BSA)，筛选出了一批与水稻光敏核不育(PGMS)基因连锁的多态性AFLP产物，已完成了对4个多态性AFLP产物的克隆，Southern杂交证明其中2个为单拷贝顺序，另外2个为低拷贝顺序。对上述三种分子标记各自的优缺点及它们在DNA多态性检测中的适用之处进行了分析探讨。

摘要:根据锤头状核酶(Ribozyme)的作用模式，设计、合成并克隆了特异性切割12-脂加氧酶(12-LO)mRNA的核酶基因。以合成的25个核苷酸长的12-脂加氧酶RNA片段为底物与转录的核酶RNA一起保温检测其体外切割活性。实验结果表明，在37℃保温时，核酶在体外对12脂加氧酶具有较高的特异切割活性，其Km值为1300 nmol/L，其kcat值为0.083/min，在50℃保温时，核酶具有很高的切割活性，其kcat值为0.31/min。

摘要:8种不同的基本培养基对水母雪莲(Saussurea medusa)细胞生长和黄酮形成的影响不同。实验结果表明，MS培养基较有利于细胞生长和黄酮形成。从MS培养基修饰得到的MG和MP培养基比前者细胞生长量与黄酮产量分别提高32%和70%。碳源、氮源、植物激素对细胞生长及黄酮形成的影响较为明显。用HPLC对细胞培养物中两种有效黄酮(Jaceosidin和Hispidulin)作了定性定量分析。

摘要:igenes eutrophus培养过程的研究表明，氮源的限制或缺乏可刺激细胞大量积累聚-β-羟基丁酸(PHB)，但PHB合成期氮源的完全缺乏，会导致细胞的PHB合成速率迅速下降；氧的限制也可刺激A.eutrophus合成PHB，但胞内PHB的积累量远小于氮源控制下的情况。在细胞的不同生长期限制氮源的供应会明显影响PHB的发酵过程，当残留菌体浓度达到20g/L至30g/L时停止流加氨水，可以得到较好的发酵水平，细胞干重，PHB含量和PHB浓度可分别达到61.9g/L、80.5%和49.0g/L。

摘要:对钝顶螺旋藻生物富集Cr(Ⅲ)的影响因素进行了研究。发现螺旋藻对Cr(Ⅲ)的生物富集主要经历了快速的吸附和缓慢的吸收两个步骤；化学键较弱的Cr(Ⅲ)化合物具有较高的富集效率；藻细胞浓度一定时，随着Cr(Ⅲ)浓度的增加，单位重量螺旋藻对Cr(Ⅲ)的富集量不断增加，最后趋于饱和；当Cr(Ⅲ)浓度一定时，随着藻细胞浓度的增加，螺旋藻对Cr(Ⅲ)的总富集量逐渐增加而单位重量藻体的富集量减少。研究还证实，螺旋藻干粉比新鲜藻能富集更多的Cr(Ⅲ)；pH值是影响Cr(Ⅲ)生物富集的一个重要影响因素，最佳pH在7左右；温度升高和加强光强均可加强Cr(Ⅲ)的富集；阳离子对Cr(Ⅲ)的富集存在一定的促进或抑制作用。

摘要:

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