摘要:动物乳腺生物反应器是利用动物乳腺特异性启动子调控元件指导外源基因在乳腺中特异性表达，并从转基因动物奶液中获取重组蛋白。应用动物乳腺生物反应器生产药用蛋白具有生产方式简单，产量大，蛋白能进行翻译后修饰等优点，是具有广阔前景的生物医药产业。本文仅就动物乳腺生物反应器的建立、检测、目的蛋白的分离纯化以及存在的问题等作一综述。

摘要:热休克蛋白家族中的许多成员如gp96\,HSP90\,HSP70等具有排斥和治疗肿瘤及传染性疾病的免疫原性，进一步研究发现热休克蛋白作为分子伴侣可结合细胞中的肽库，它本身没有抗原性，抗原性由结合的短肽所决定。热休克蛋白将结合的短肽呈递给I类MHC分子，进而激活特异性CTL和记忆性T细胞，引发机体细胞免疫反应。据最新发现gp96还可能有与MHC一样的功能，可直接将结合的多肽抗原呈递给T细胞。近年来对哺乳动物的二种主要热休克蛋白gp96和HSP70的免疫机制和作为治疗性疫苗的优越性进行了详细研究，这为乙型肝炎和乙肝继发性肝癌的免疫治疗提供了新思路。

摘要:光学椭偏显微成像是一种新型超薄膜及表面显示技术，是研究生物分子与固体表面吸附以及生物分子之间相互作用的一种简单、快速和可靠的手段。它不仅能够大面积精确显示超薄膜的厚度分布，而且能够用于表面实时吸附的动力学研究。在抗原抗体检测分析方面，它不需要像酶联免疫法、荧光免疫法和放射免疫法那样对待测物作标记，也不会对待测生物分子活性造成任何扰动和损伤，操作简单，费用低廉。另外，它还弥补了传统的椭偏法的不足之处，能够有效地区分非特异性吸附、脱吸附或表面污染带来的干扰。

摘要:可转化人工染色体(Transformation\|competent Artificial Chromosome,TAC)是具有克隆和转移大片段基因能力的新型载体，是植物基因克隆和转化的有效工具。为了克隆小麦抗白粉病基因和其它基因，本研究用TAC载体pYLTAC17构建了带有抗白粉病基因Pm21的小麦簇毛麦6VS/6AL易位系的基因组DNA文库。该文库包含210万个克隆，平均插入片段35kb，库容相当于普通小麦基因组的49倍。本文库以约1000个克隆组成1个混合池的方式保存在22块96孔平板，可用PCR方法进行文库的筛选。

摘要:用双脱氧末端终止法对侵染性烟草花叶病毒普通株中国分离物(TMV-vulgar,Chinese Isolate,TMVCv)和番茄株弱毒疫苗TM-N14(Attenuated TMV vaccine strain)基因组cDNAs的核苷酸全序列进行了测定，并分析和比较了其基因组的结构和特征。结果表明：普通株基因组(Genbank接收号：AF165190)为6395个核苷酸；4个功能性开放阅读框架(ORF)，分别编码126kD/183kD的复制酶、30kD运动蛋白和17.6kD外壳蛋白。弱毒疫苗TMV-N14基因组(Genbank接收号：AF155507)为6384个核苷酸；5个功能性ORF分别编码985kD/126kD/183kD的复制酶、27kD运动蛋白和17.6kD外壳蛋白。与参比序列核苷酸和氨基酸序列比较：普通株核苷酸序列同源率为99.4%；推断的复制酶与运动蛋白分别有5个和2个氨基酸残基不同。TMV-N14核苷酸序列同源率为99.7%；核苷酸位置2670～2672和5632～5634分别发生乳石(Opal)突变(UGA)和赭石(Ochre)突变(UAA)；推断复制酶有13个氨基酸残基发生了变异。

摘要:以小球藻病毒腺嘌呤甲基转移酶基因(amt)和主要外壳蛋白VP54基因的5′上游调控序列构建大肠杆菌和真核藻转化载体。以P_RP_L及CaMV35S启动子为阳性对照，研究了小球藻病毒来源的两种调控序列在E.coli和真核藻细胞中的启动活性。发现P_AMT在4种E.coli菌株中都具有极强的调控活性，启动Luc基因表达而产生的酶活性高于P_RP_L 50～400倍；P_VP54在DH5α中也具有较强的启动活性。同时PAMT在两种小球藻中启动GUS基因瞬时表达的能力也明显高于CaMV35S启动子，表明它们有可能在真核藻类遗传转化中具有很好的应用前景。

摘要:将编码血管内皮细胞生长因子受体Flt-1胞外区1-3 loop 316个氨基酸残基的cDNA插入到含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris酵母载体中，构建了重组表达质粒pPIC9K/Flt-1(1-3)，转化酵母宿主菌GS115，筛选His⁺Mut^s表型转化子，经摇瓶培养，1%甲醇诱导表达4 d后，SDS-PAGE结果显示，培养上清中Flt1(13)表达量达总蛋白的30%以上。ELISA及Western blot实验表明，表达产物具有良好的抗原性和特异性。生物学活性检测证实其具有结合VEGF的能力和抑制VEGF对HUVEC细胞的促增殖功能。

摘要:质粒pAcIEneo携带杆状病毒极早期基因IE1启动子驱动的新霉素抗性基因(neo)，经酶切回收后插入到质粒pAc34DZ1的SacI位点上，构建成多角体外膜蛋白基因(pe)失活的转移载体pAc34DZ2。我们曾构建了一个多角体完整(ocu+)的表达苏云金杆菌(Bt)截短cryIab基因的重组病毒(1)vAcPhBtT。为了改进这一重组病毒的杀虫效率，将转移载体pAc34DZ2与重组病毒(1)vAcPhBtT DNA共转染Sf9细胞，进行第二次同源重组。由于neo基因的表达，用G418筛选得到重组病毒(2)vAcPhBtTPE^-；Southern blot证明vAcPhBtTPE-的构建是正确的，经SDS-PAGE分析，重组病毒(2)仍然能在昆虫细胞中表达80kD的Bt截短毒蛋白，但不表达34kD的多角体外膜蛋白。电镜观察重组病毒(2)无多角体外膜，碱解时病毒粒子释放的速度快于重组病毒(1)。以重组病毒(2)感染甜菜夜蛾三龄幼虫，LC₅₀比野生型病毒小了接近1倍，LT₅₀提前近2d。

摘要:将提取的玉米RNA反转录成Cdna，以此为模板，合成特异性引物，应用多聚酶链式反应(PCR)技术扩增出目的片段。对PCR片段直接进行序列分析，测定并克隆玉米的核糖体失活蛋白(RIP)基因。序列分析表明，已测定的玉米RIP基因序列长为983bp，其中编码区长828bp，共编码有275个氨基酸和一个终止密码子，GC含量为58.3%。与已发表的序列相比较其核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性分别为98.4%和97.4%。

摘要:以高转移性人肺巨细胞癌细胞系PG的总RNA为模板，用RT-PCR方法扩增人尿激酶受体(uPAR)的cDNA。将其亚克隆至pGEM-T载体后进行测序，结果表明，我们所克隆的uPAR cDNA片段与文献报道的人uPAR基因编码区cDNA序列高度同源(达99%)，其中第705、746和755碱基分别由A、A和G替代了文献中的T、G和A，从而导致了第249和252位氨基酸由Gly和Glu变为Asp和Gly，我们已将此序列申请登录GenBank，登录号为AF257789。

摘要:将重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素3(GM-CSF/IL-3)融合蛋白表达菌BL21(DE3)(pFu)作为研究对象，对于以乳糖作为诱导剂时重组目的产物的诱导表达规律进行了深入的研究。分析比较了不同培养基中，不同生长阶段进行诱导对于产物表达的影响。对诱导所需的乳糖浓度、诱导持续时间长短等因素亦进行了研究。实验结果表明，在对诱导条件进行优化控制的前提下，利用乳糖作为诱导剂可以达到与IPTG类似的诱导效果。随后的研究中，将乳糖作为诱导剂应用于高密度发酵过程。这些研究结果为乳糖作为诱导剂最终应用于重组基因工程药物的工业化生产提供了有益的参考和借鉴。

摘要:用双引物法对GI基因进行体外定点突变，构建了突变体Q20L和G247D。含突变基因的重组表达质粒pTKD-GIQ20L及pTKDGIG247D在E.coli K38菌株中表达。纯化的突变酶与野生型酶相比：(1) GIQ20L的最适反应温度下降5℃，热稳定性为野生型酶的78%，对底物的亲和性增强；(2) GIG247D的酶活提高约33%，最适pH下降0.6个单位，但热稳定性降低。初步分析认为,Gln 20位于α0～α1螺旋之间，其亲水侧链被Leu的疏水侧链取代后，分子表面增强的疏水作用，反而不利于蛋白质的稳定，使GIQ20L的热稳定性降低。Gly247是酶活性中心β折叠(242～247aa)的最后一个残基。引入电负性极强的Asp后，可能改变分子的静电场分布，影响了活性部位的电荷传递过程，使GIG247D酶活提高。引入的电荷，可能改变活性中心可解离基团的pKa，使其最适pH下降。另外Asp247的侧链在周围空间结构中显得过于拥挤，易与其他侧链产生排斥，由此影响到β-折叠的稳定性，接近亚基结合面的Asp247，可能进一步影响到亚基间相互作用的稳定性，最终导致酶热稳定性的降低。GI酶活和最适pH的改善更利于工业生产。

摘要:为探讨三结构域重组纤连蛋白(FN)在肿瘤治疗中的作用，构建了两个三结构域重组FN表达质粒pF94-62和pF94-82，它们分别编码两个重组多肽：CH62 (FN的Pro 1239-Ser 1515经Met 和Ala-1690Val 2049相连)和CH82 (从CH62中删除了Hep II C端和Cell II结构域N端的Pro1953-Glu1978)。含表达质粒pF94-82的工程菌经37℃培养，CH82得到表达，表达产物主要以包涵体形式存在，经尿素变性与复性处理后，通过肝素琼脂糖亲和层析纯化，纯化产物进行细胞粘附试验。CH62在大肠杆菌中的表达效率很低(5%)，而CH82的表达效率很高(21%)，提示FN分子中Cell II结构域的N端顺序是影响三结构域重组多肽在大肠杆菌中表达的关键结构。纯化的CH82具有结合肝素和结合细胞的功能，且结合细胞的能力比双结构域FN更强。CH82的制备为进一步研究具有更强的抑制肿瘤转移作用及免疫调节作用的基因工程制品奠定了基础。

摘要:利用离子束注入生物技术对花生四烯酸产生菌(Mortierella alpina)进行诱变高产菌筛选。筛选到高产菌I₄₉N₁₈，该菌每升培养液可得生物量30.80g(约4%的含水量)，干菌体油脂含量为25.8%，其中花生四烯酸的含量占总.脂的45.37%。30L和250L发酵罐发酵试验，该高产菌的花生.四烯酸得率为4.0g/L。

摘要:选育到一株对16β-甲基-17α，21-二羟基孕甾-1，4-二烯3，20-二酮(Ⅱa)11α-羟基化活性强的犁头霉A28菌株，并发现底物21乙酰化(Ⅱb)可明显提高11α-羟基化的能力。在适宜的转化条件下，Ⅱb投料浓度0.5%，产物16β-甲基-11α，17α，21-三羟基孕甾-1，4-二烯3，20-二酮(Ⅲ)收率为73%，结构经波谱分析确认。

摘要:研究了搅拌转速、pH控制以及结合摇瓶发酵过程中不同时间硫酸铵的补加对β-1，4-聚糖酶形成的影响，优化得到A-30的β-1，4-聚糖酶分批发酵操作条件和初步优化了(NH₄)₂SO₄流加发酵条件。研究结果显示麸皮表面有大量A-30菌体细胞的吸附，搅拌转速对菌体吸附和β-1，4-聚糖酶的形成有明显影响；发酵过程中pH下降有利于β-1，4-聚糖酶形成。采用了初期以5mL/h的速率恒速流加，后期测定(NH₄)₂SO₄浓度进行调整的流加方法，使木聚糖酶活达到616IU/mL，纤维素酶活达到1.33UI/mL。

摘要:虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(Huwentoxin-Ⅰ,HWTX-Ⅰ)是从虎纹捕鸟蛛(-Selenocosmia huwena)-的粗毒中分离出的一种多肽类神经毒素。为了探明该毒素分子中唯一的Arg残基与其生物学活性的关系，运用固相多肽合成技术和Fmoc化学直接构建了Ala取代HWTX-Ⅰ第20位Arg(R20)的突变体R20A-HWTX-Ⅰ；将合成的突变体置于含谷胱甘肽的缓冲体系中氧化复性后用反相和特殊设计的离子交换HPLC纯化，并对之进行氨基酸组成、Edman降解与质谱分析。活性测定结果表明，HWTXⅠ分子中的R20被A取代后，活性下降了92%，提示R20是与活性密切相关的重要残基。

摘要:金属螯合亲和层析是近20年发展起来的一项新型分离技术。它以配基简单、吸附量大、分离条件温和、通用性强等特点，逐渐成为分离纯化蛋白质等生物工程产品最有效的技术之一。本文从单组分蛋白质入手，考查了pH值、铵离子浓度、不同铵盐等对蛋白质洗脱的影响，并进行了分析。还对不同的金属螯合柱和不同性质蛋白质的洗脱性能进行了研究，比较了不同金属离子与蛋白质亲和力的区别，为实际体系的分离研究打下了基础。

摘要:在东北红豆杉细胞悬浮培养中，分别研究了稀土化合物(硫酸铈铵)、有机溶剂(油酸和邻苯二甲酸二丁脂)和稀土化合物与有机溶剂的协同作用对紫杉醇释放的影响。在此基础上深入研究了在东北红豆杉细胞两液相培养中，紫杉醇释放率随不同的有机溶剂(烷烃、有机酸、醇和脂)、有机溶剂的体积分数、有机溶剂的加入时间和有机溶剂相毒性的变化规律。结果表明分别加入稀土化合物和有机溶剂都明显促进紫杉醇的释放，特别是有机溶剂更显著促进紫杉醇的释放。但在东北红豆杉细胞两液相培养中，稀土化合物加入不能进一步促进紫杉醇的释放。因此两液相培养中有机溶剂本身就是很好的产物释放剂。紫杉醇的释放率由对照组的40%提高到75%以上。

摘要:含易降解有机物的对苯二甲酸有机废水在厌氧处理时，其中的易降解有机质通过甲烷发酵被优先利用，其中间代谢物对对苯二甲酸的降解有抑制作用，同时，对苯二甲酸自身的降解也存在底物抑制现象。本文建立了有易降解有机质存在时对苯二甲酸厌氧降解的抑制动力学模型方程：q=q_max SS+Ks[1+(I-0.86)/K_I,s，并利用非线性回归，确定了模型参数q_max=1972.0mgTA/gVSS·d;K_s=20.2844gTA/L;K_I,I=2.041gCOD/L;K_I,s=0.0108 gTA/L,实验数据对该动力学方程能较好拟合。在此基础上提出两段厌氧处理新工艺。

摘要:研究了水杨酸对红豆杉细胞培养中紫杉烷合成的影响。在适宜浓度的水杨酸诱导下，紫杉醇(Taxol)的产量提高了近3倍，同时10去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DAB)与巴卡亭Ⅲ(Baccatin Ⅲ)相应上升。通过对紫杉醇合成代谢途径的动力学分析，初步推断水杨酸的加入提高了10-DAB合成速率。并通过水杨酸和硝酸银的配伍诱导，实现了诱导子之间的协同作用，获得了39 mg/L的紫杉醇含量，比两个诱导子单独作用时的最高含量之和还高出50%。

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