摘要:转录后基因沉默(PTGS)是近10年发现的一种生物(特别是真核生物)细胞抵抗外来核酸入侵及保持生物自身基因组完整性的防御机制，特别是与生物的病毒抗性密切相关。PTGS最初在植物内发现，近几年又分别在真菌、动物等生物细胞内发现。经过10年的研究，我们对PTGS的机制和特点有了相当的了解。这不但对深入地了解基因的表达调控机制意义重大，而且还可为人们如何调控和利用PTGS奠定了基础。本文从PTGS的特点、PTGS与病毒抗性、PTGS在真核生物内发生的广泛性等方面进行综述，并对PTGS发生的机制进行了讨论。

摘要:从70年代以来学者们用各种杆状病毒做了大量的针对各类生物甚至人类的安全性试验，几乎所有试验都证明杆状病毒是安全的，但也有个别试验得到不同结论，在这些试验的论文发表后曾引起学术界两次大的争论，这些不同结果后来均被其他学者甚至作者本人用实验否定。90年代以来杆状病毒大量作为载体表达外源基因，其中有些论文报道了在哺乳动物细胞中的表达，引起对杆状病毒安全性的怀疑，本文对此进行了分析总结。本文还利用自己研制的重组杆状病毒杀虫剂的安全性试验对鲜有报道的重组杆状病毒杀虫剂安全性进行了论述。作者认为杆状病毒杀虫剂包括重组杆状病毒杀虫剂都是安全、值得推广应用的。

摘要:脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是G-菌造成的败血症或脓毒性休克病理中最重要的致病因素，若在整个病理过程的上游，即在细菌内毒素水平阻断脓毒性休克的发生，就可能限制或阻止病理性的次级炎症级联反应。本文综述了各种不同来源的LPS结合蛋白在结合LPS从而中和并阻断内毒素的过程中的功效及应用现状，探讨了最终用于人类败血症或脓毒性休克临床治疗的有效方案。

摘要:多形汉逊酵母是一种有很大潜力的外源基因表达系统，已在科研和工业化生产上广泛应用。用它生产来源于真核生物的外源基因有许多优点，如重组菌减数分裂稳定、能进行正确的翻译后加工和修饰、表达量高等。许多有商业价值的蛋白质在这一系统中得到成功表达，有的已投入市场。本文综述多形汉逊酵母宿主菌的生物学特性、基因工程操作技术、发酵及外源基因表达等方面的特点和最新进展。

摘要:报道了毕赤酵母表达人白细胞介素11的下游工艺研究，并对其产物进行了分析鉴定。所用工艺流程为离心收集上清、超滤浓缩脱盐、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤。所得产物经SDSPAGE电泳、RPHPLC分析、N端和C端序列分析、质谱、等电点分析和生物学活性分析，结果表明：产品纯度大于97%，结构和性质与E.coli融合表达的Neumega完全一致。

摘要:本文以黑曲霉(Aspergillus niger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象，通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列，换用在毕赤酵母(Pichia pastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因(PhyA-as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合入酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDSPAGE结果与表达产物酶学性质研究表明植酸酶得到分泌表达，且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌，其中SPANⅢ菌株达到了在摇床培养条件下，每毫升发酵液产生165000u植酸酶的水平，基本满足工业化生产的要求。

摘要:弱毒疫苗ToMV-K的复制酶基因在2670-2672核苷酸处发生UGA突变，研究表明该突变是导致病毒弱化的主要原因。通过ToMV-K复制酶的突变区与其它具有UGA渗漏终止密码的植物ssRNA病毒基因组通读结构区的分析和比较，发现ToMV-K和其它植物病毒的UGA渗漏与通读相关基因的共同特征：CGG基元，通读区的α-螺旋结构和一些疏水氨基酸残基使UGA的通读成为可能。这些渗漏与通读的特征可能才是ToMV\|K致弱的根本原因。可以根据这一模式，探讨对其它植物ssRNA的病毒如PVX、PVY、CMV等的基因组改造和致弱研究。

摘要:利用PCR方法获得了马铃薯病毒中国株系(PVY-C)HC-Pro基因的5个缺失突变体，构建了相应的植物表达载体。通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化了烟草品种K₃₂₆(Nicotina tabacum cv.K₃₂₆)。PCR和Southern blot分析证明了HCPro基因及其缺失突变体已整合到烟草基因组中，Western blot表明它们在转基因烟草中得到了表达。侵染性试验发现HCPro中心区域介导转基因烟草中PVY-C和黄瓜花叶病毒(CMV)、PVYC和马铃薯X病毒(PVX)之间的协生作用，从而明确了PVY-C HC-Pro中心区域为病毒协生作用的功能区域。

摘要:利用反转录PCR技术，从U₉₃₇细胞总RNA中，扩增编码人可溶性CD₁₄的基因序列，构建了重组表达质粒pEF1/HisC/sCD₁₄^348aa；用脂质体转染法，实现了在真核细胞中的高效表达；用免疫亲和层析纯化表达产物，纯度达90%以上；LPS刺激U₉₃₇细胞产生CD₁₄的变化，证明了表达产物具有结合LPS的功能。

摘要:用改造的雪花莲凝集素基因GNAmm与合成的苏云金芽孢杆菌(Bt)毒蛋白cry1Ac基因构建了带有双价基因的植物表达载体，在该表达载体中这两个基因的转录分别受笋瓜PP2启动子(SPP2P)和CaMV 35S启动子的调控。通过根癌土壤杆菌介导转化法，获得了一批抗卡那霉素的转化再生烟草植株。PCR检测及基因组DNA Southern blot\,Slot blot杂交分析的结果表明Gna基因和Bt基因已整合到烟草总DNA中。用Bt毒蛋白抗血清进行Western blot分析，转基因植株均有Bt杀虫蛋白的不同程度的表达。对转化再生烟草的虫试结果表明，在所受试的19株烟草中60%的植株上的棉铃虫在5天内死亡率达到100%，而且存活幼虫的生长发育受到明显抑制；蚜虫抑制生长试验表明，多数转化再生植株具有较强的抗蚜活性，平均能够抑制桃蚜50%～60%的蚜口密度，有的高达80%以上。以上结果表明利用这两个改造过的抗虫基因可以获得既抗虫又耐蚜的转双抗虫转基因植物。

摘要:内皮抑素（Endostatin）是近年来新发现的一种内源性新生血管生成（Angiogenesis）抑制因子，通过抑制新血管生成而抑制肿瘤的形成和转移且不会引起耐药性，具有极高的临床应用前景。巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris)具有表达率高、产物可分泌、可对高等真核生物蛋白正确进行翻译后加工、遗传稳定、发酵工艺成熟等优点被用来进行重组人Endostatin的表达。本研究用PCR的方法从人胎肝cDNA文库中扩增出人Endostatin的cDNA，测序正确后转入毕赤巴斯德甲醇酵母，并获得了高效可溶型表达，用肝素亲和层析的方法进行纯化，纯化后产物经SDSPAGE薄层扫描分析纯度达987％以上，质谱测定分子量为2043kD与理论值一致，蛋白质N端序列测定结果为SPPAHTHRDFQPVLH与天然序列一致。生物活性检测证明可抑制鸡胚尿囊绒毛膜（CAM）的新生血管生成（Angiogenesis),并可抑制血管内皮细胞的增殖。因此用酵母表达系统可以得到具有生物活性的内皮抑素，经纯化后可用于进一步的生物功能和作用机理试验。

摘要:将鸡贫血病毒vp1和vp2基因分别克隆入转移载体pBacPAK8中，获得重组转移质粒pBac-vp1和pBac-vp2。以上两质粒分别与Cvn Ⅰ酶切线性化的亲本病毒Bm\|BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞，通过蓝白斑筛选，纯化得到重组病毒Bm-vp1和Bm-vp2。PCR分析表明vp1和vp2基因已整合进杆状病毒基因组中。将Bm-vp1和Bm-vp2共感染5龄家蚕，通过表达产物免疫SPF鸡产生的抗血清与CAV感染的MDCCMSB1细胞的间接荧光抗体分析，证明表达产物能诱导鸡产生相应的抗体，而且能够保护子代鸡免受CAV的攻击。该研究表明，表达VP1和VP2蛋白的重组家蚕杆状病毒(Recombinant BmNPV)是很有前途的CAV亚单位疫苗的生产系统。

摘要:利用根癌农杆菌介导的遗传转化法，把玉米转座子Ac片段(合成转座酶)和Ds因子(转座序列)分别导入粳稻品种中花11，获得了400多个转化株系。有63个株系的转基因T₀代植株或T₁代植株出现了可见的形态变异，包括抗病、白苗、黄苗、白条斑叶、有色秆、矮秆、匍匐茎、雄性不育、抽穗早、抽穗迟、多倍体等突变类型。对突变性状的形态及分子生物学分析，有些突变类型可能与转座子插入有关。

摘要:根据本实验室所获得的香蕉果实特异性ACC合酶cDNA序列，以改进的接头连接PCR方法通过两次步行从香蕉基因组中分别扩增并克隆了其基因5′旁侧区近端1.2kb和远端1.6kb的片段。通过拼接，构建出含有2505bp启动子区和转录起始位点下游86bp的共2591bp的基因5′旁侧区片段；其启发性动子区中34至28为推测的TATA盒序列，158至146为推测的CCAAT盒，与其它植物基因启动子结构相类似。将2.5kb启动子片段与β-葡糖苷酸酶(GUS)基因编码序列融合，用基因枪法将构建的嵌合基因转入香蕉叶、根和果实的细胞后，只在果实细胞中观察到报告基因的瞬时表达，从功能上证明了此25kb的启动子片段具有指导报告基因在香蕉果实中特异性表达的作用。同时构建5个含不同5′端缺失启动子与GUS融合基因的表达载体。瞬时表达结果表明可能负责果实特异性表达的调控区存在于转录起始位点至-1111的启动子区中，而在-1111至-608区间可能存在一个正控制区。

摘要:利用氯化苄分别从真菌顶头孢(Cephalosporium acremonium)和产黄头孢(Acremonium chrysogenum)中提取总DNA，通过PCR方法扩增脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶/羟化酶基因cefEF，结果只能从产黄头孢DNA中扩增出cefEF基因。测序结果表明，其与已报道的基因序列只有3个碱基的差异，推断的氨基酸序列只有2个氨基酸有差异，并未涉及活性中心。同时表明，国外所指的与该酶有关的顶头孢(Cephalosporium acremonium或Acremonium chrysogenum)对应的是国内的产黄头孢(Acremonium chrysogenum)。

摘要:将构建的一种具溶栓和抗栓双重功能尿激酶原突变体(DscuPA\|32K)基因，在大肠杆菌中进行表达。由于DscuPA\|32K分子较大并且表达量较高，目的蛋白质基本以包涵体的形式存在。包涵体中的蛋白质是无活性的蛋白质，为了获得有活性的蛋白质，就需要对包涵体进行变性及复性。尝试了一种新的凝胶色谱柱复性方法，并通过柱复性方法与常规的稀释复性方法进行了比较，发现柱复性方法明显优于稀释复性方法，具有成本低，效率高，并对目的蛋白质(DscuPA\|32K)进行了初步纯化等优点，尤其对酶这一类容易失活降解的蛋白质进行复性时，很值得进行推广应用。

摘要:研究了重组CHO细胞批培养过程中，氨浓度对细胞的葡萄糖、谷氨酰胺及其它氨基酸代谢的影响。表明，细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的得率系数随着氨浓度的增加而降低，起始氨浓度为566mmol/L的批培养过程与起始氨浓度为021mmol/L的批培养过程相比，细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的得率系数分别下降了78%和74%，细胞对其它氨基酸的得率系数也分别下降了50%～70%。氨浓度的增加明显地改变了细胞的代谢途径，葡萄糖代谢更倾向于厌氧的乳酸生成。在谷氨酰胺的代谢过程中，谷氨酸经谷氨酸脱氢酶进一步生成α酮戊二酸的过程受到了氨的抑制，而氨对谷氨酸经谷氨酸转氨酶反应生成α酮戊二酸的过程有促进作用，但总体上谷氨酸进一步脱氨生成α酮戊二酸的反应受到了氨的限制。

摘要:为了考查营养条件对质粒DNA的生产影响，采用不同的培养基培养含pcDNA33-HBS质粒的大肠杆菌JM109。实验结果表明：碳源、氮源对质粒DNA产量有明显的影响。葡萄糖是质粒合成过程中较佳的碳源，蛋白胨是较佳的氮源。在M9P培养基中，选择合适的硫酸铵浓度对质粒DNA的生产有一定的作用。由于Gly,Asp,Glu能提供合成核苷酸的氮源，在M9G培养基中添加12g/L的Asp,1.0g/L的Glu和0.4g/L的Gly后，经20h培养，质粒产量可达25mg/L。外源核苷也影响质粒DNA的产量，通过添加0.4g/L胞苷与胸苷的混合物(摩尔比为1∶1)到M9P培养基中，质粒DNA的产量可达35mg/L。

摘要:为研究家兔精子膜蛋白rSP10在精子膜上的定位及其免疫原性，将不含编码信号肽序列的rsp10基因插入表达载体pET30a中，N端具有His6肽的融合蛋白re-rSP10得到高效表达，表达产物达细菌总蛋白的67%。经DEAE柱层析纯化表达产物,re-rSP10，产量约为50mg/mL培养物。Western实验结果表明，精子膜蛋白多克隆抗体能识别re-rsp10，说明大肠杆菌表达的re-rSP10具有免疫原性。用纯化的re-rSP10免疫雌性兔，得到re-rSP10专一性多克隆抗血清。将re-rSP10专一性多克隆抗血清加入获能精子中，发现SP10专一性多克隆抗血清严重影响获能精子的运动并且表现为剂量依赖性，但获能精子凝集现象并不明显。

摘要:应用地高辛标记探针对转pGH基因(猪生长激素基因)猪染色体进行原位杂交，经胶体金抗体、银增强放大系统检测外源pGH基因在染色体上的整合位点。研究表明，转基因阳性个体间外源基因整合位点存在差异，但对个体而言，外源基因总是集中分布于某一特定的染色体上。本研究将为探究外源基因整合位点与其表达效率的关系及今后定点整合的研究提供理论指导。

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