摘要:大肠杆菌分泌蛋白二硫键的形成是一系列蛋白协同作用的结果，主要是Dsb家族蛋白，迄今为止共发现了DsbA、DsbB、DsbC、DsbD、DsbE和DsbG。在体内，DsbA负责氧化两个巯基形成二硫键，DsbB则负责DsbA的再氧化。DsbC和DsbG负责校正DsbA导入的异常二硫键，DsbD则负责对DsbC和DsbG进行再还原，DsbE的功能与DsbD类似。除了直接和二硫键的形成相关外，DsbA、DsbC和DsbG都有分子伴侣功能。它们的分子伴侣功能独立于二硫键形成酶的活性并且对二硫键形成酶活性具有明显的促进作用。基于Dsb蛋白的功能特性，利用它们以大肠杆菌为宿主表达外源蛋白，特别是含有二硫键的蛋白，取得了很多成功的例子。本文简要介绍了这方面的进展，显示Dsb蛋白在促进外源蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达方面具有广阔的应用前景。

摘要:对极端嗜盐古菌遗传转化系统的研究进展进行了综述，内容包括抗性标记基因的选择，基因克隆和表达载体系统的发展以及受体系统的改造。

摘要:以染色体大片段的删除和重排为主要特征的小鼠染色体工程逐渐成为一种大规模研究小鼠基因功能的重要手段。这里重点介绍了小鼠染色体工程的最新研究进展。

摘要:类胡萝卜素具有多种生物功能，尤其在保护人类健康方面起着重要的作用，如它们是合成维生素A的前体，能够增强人体免疫力和具有防癌抗癌的功效。人体自身不能合成类胡萝卜素，必须通过外界摄入；但类胡萝卜素在许多植物中含量较低，并且很难用化学方法合成。随着类胡萝卜素生物合成途径的阐明及其相关基因的克隆，运用基因工程手段调控类胡萝卜素的生物合成已成为可能。本文综述了微生物和高等植物类胡萝卜素生物合成途径中相关基因的克隆，以及运用这些基因通过异源微生物生产类胡萝卜素和提高作物类胡萝卜素含量的基因工程研究进展。

摘要:肽核酸(PNA)是一类人工合成的核酸类似物，PNA与核酸链以Waston-Crick碱基配对方式稳定互补结合，具有高度的亲合性、稳定性、特异性特征，PNA能调节基因的复制、转录（或逆转录）和翻译过程，有着广泛的分子生物学效应，显示出其作为基因调节药物的应用潜力。

摘要:组织特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠是进行组织特异性基因剔除研究的重要工具。为了建立胰腺组织特异性Cre转基因小鼠，我们通过PCR克隆了大鼠胰岛素基因启动子，并用它指导Cre基因在胰岛细胞中的特异性表达。在Cre重组酶基因5′端添加了真核核糖体结合序列和核定位序列以使Cre重组酶能穿越核膜在细胞核中发挥功能；同时，在Cre基因3′端添加了含内含子的3′端人生长激素基因。表达载体经显微注射导入小鼠受精卵以建立转基因小鼠。PCR检测显示共获得7只Cre整合阳性的转基因首建者小鼠；RTPCR结果表明其中1只首建者小鼠的子代鼠在胰腺中转录了外源基因，进一步的Southern杂交结果表明，该转基因小鼠能够在胰腺中表达有功能的Cre重组酶。 

摘要:利用Q Sepharose H.P.离子交换柱层析在8mol/L尿素变性条件下对huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白进行初步纯化，然后再利用Sephacryl S-200分子筛柱层析复性及纯化后获得目的蛋白，其纯度达到95%以上。该纯化方案成功地解决了稀释复性或透析复性产物在进行Q Sepharose H.P.离子交换柱层析时目的蛋白不稳定而沉积于柱上的问题，获得了较好的复性效果，复性率达到80%以上。使用该纯化方案，1天内便可基本完成重组蛋白的复性及纯化过程，而且也便于扩大。

摘要:为改造甲醇利用型酵母Pichia pastoris来生产腺苷甲硫氨酸（SAM，S-adenosylL-methionine），我们将一个带有SAM合成酶基因的胞内表达质粒转化入Pichia pastoris菌株GS115，经过G418抗性筛选得到一株有两个基因拷贝的转化子。该菌在含有甲醇和甲硫氨酸的培养基中生长5d后，其细胞内的SAM的产量比原始菌株提高了30余倍。对该菌生产SAM的培养基中的碳源与氮源进行了优化，结果显示碳源的控制对该菌SAM产量的影响很大。在试管水平，该菌在含有0.75％的L-methionine并且碳源和有机氮源经过一定程度优化的培养基中，生长6d后SAM产量达到1.58g/L。

摘要:根据嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的核苷酸序列设计引物，运用聚合酶链式反应（PCR）扩增出与预期大小相符的基因片段。将此基因片段克隆至质粒pRSET A的BamHI和EcoRI位点，构建重组质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导获得高效表达，SDS-PAGE蛋白电泳表明在39.9kD处出现超强特异带，占总蛋白的51％。以 Ni-NTA-Conjugate抗体进行Western blot分析证明该399kD的蛋白为所表达的融合蛋白。纯化融合蛋白注射雄性新西兰大白兔可诱导产生特异抗体。ELISA和Western blot检测结果显示，该抗体与表达的融合蛋白和从嗜水气单胞菌中提取的36.9 kD外膜蛋白均呈阳性反应，表明所表达的融合蛋白仍保持原有外膜蛋白的免疫原性，为此融合蛋白作为疫苗的候选成份提供理论基础。

摘要:将含有G138P单点突变和G138P-G247D双点突变的GI结构基因，分别克隆入E.coli链霉菌穿梭载体pHZ1272，成功构建了穿梭表达载体pHZGI1和pHZGI2。通过原生质体的转化，将穿梭表达载体导入变铅青链霉菌TK54菌株。30℃振荡培养24h，加入2 μg/mL 硫链丝菌素诱导表达12h。SDSPAGE电泳表明，两个穿梭载体在TK54菌株内表达出425 kD特异性条带。薄层扫描显示，突变体酶GIG138P和GIG138PG247D分别约占可溶性蛋白的19%和22%。Western杂交进一步证实GIG138P和GIG138PG247D在变铅青链霉菌TK54中获得了表达。

摘要:新霉素抗性基因(neo)是真核表达载体的常用筛选标志neo基因编码新霉素磷酸转移酶Ⅱ（NPT Ⅱ），能催化G418、卡那霉素等多种氨基糖苷抗生素分子磷酸化而使之失去抗菌活性。通过对真核表达载体的筛选标志基因neo进行定点突变，以降低NPTⅡ的活性，然后用含neo突变体的真核表达载体pmDNA构建荧光素酶表达质粒，稳定转染CHO-K1细胞，发现表达荧光素酶的阳性细胞比例达到95%，其中高表达细胞集落的筛选率明显高于对照组。

摘要:用根据抗病基因保守区设计的一对简并性引物，从小麦簇毛麦易位系6VS/6AL cDNA中PCR扩增获得一个具有抗病基因核苷酸结合位点（Nucleotide binding site, NBS）结构特点的DNA片段克隆N7。从小麦簇毛麦易位系6VS/6AL基因组TAC（Transformationcompetent artificial chromosome, TAC）文库的22块96孔板提取所有2112个克隆池（每个池含约1000个克隆）的质粒，再根据N7的核苷酸序列设计一对特异引物，用克隆池PCR（pooled PCR）法经分级筛选从文库中获得一个阳性克隆。以N7为探针，通过Southern 杂交证实了该TAC克隆为真正含有抗病候选基因的克隆。研究结果表明克隆池PCR法对克隆数目巨大的基因组文库的筛选很有效。

摘要:构建了原核表达质粒p ET-30a(+)/sBLyS，转化大肠杆菌BL21(λDE3)，IPTG诱导表达的重组蛋白以可溶部分和包涵体两种形式存在，为了提高可溶部分重组蛋白的比例，确定16℃为诱导表达的温度，最佳表达时间为12h。在此条件下大规模诱导表达，经Ni²⁺亲和层析获得重组人sBLyS。重组蛋白的等电点约为7.1～7.3，活性状态时是非共价连接的同源三聚体。MTT法测重组人sBLyS对B淋巴细胞的增殖作用结果表明，B细胞经抗IgM原血清活化后，它的增殖程度在一定的重组人sBLyS浓度范围内随其浓度的增加而提高，sBLyS刺激时间对B细胞增长也有显著影响，sBLyS以2μg/mL刺激3d B淋巴细胞的增殖达最大。

摘要:利用不含附加营养成分的2,4-D培养基（2mg/L）诱导明恢63的成熟种子，9天预诱导后获得了大量的愈伤组织。利用基因枪辅助的土壤农杆菌转化法将天花粉蛋白（Trichosanthin, TCS）基因转入籼稻明恢63的愈伤组织，并通过再生（含有3mg/L 6-BA, 0.5mg/L ABA和1mg/L NAA的N6培养基）获得了转基因植物。 Southern blot分析和Western blot检测证明外源基因已经插入到T0代明恢63的基因组中并获得了表达。初步研究结果表明，转基因水稻对稻瘟病菌侵染具有抗性。

摘要:增殖性瘢痕组织中胶原蛋白的合成显著增加从而导致胶原的过度沉积。利用核酶特异地抑制前胶原基因的表达可减少胶原蛋白的合成，为瘢痕的研究和防治提供了新的思路。为研究用核酶抑制前胶原基因表达的可能及效果, 设计并构建了针对α₁(Ⅰ)型及α₁(Ⅲ)型前胶原基因的二个单价核酶串联的二联核酶基因真核表达载体，并对其体外切割活性进行研究。结果表明该二联核酶的切割效果明显，均能有效地切割底物，为进一步研究核酶对前胶原基因表达的抑制作用以及利用核酶防治瘢痕产生打下基础。 

摘要:蜘蛛大壶腹线产生的拖丝是非常优良的纤维蛋白, 具有独特的强度和弹性。基于拖丝蛋白高度重复序列和部分cDNA序列, 合成蜘蛛拖丝蛋白基因单体, 通过头尾相连的构建策略, 得到拖丝蛋白多聚体, 与原核高效表达载体pET30a(+)连接, 转化大肠杆菌BLR(DE3), 用IPTG诱导表达。 表达产物经His.Bind树脂金属螯合亲和层析一步纯化, 纯度达90%以上, 表达量为20mg/L。SDS-PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为37kD, 其值与氨基酸组分分析结果与理论推算值基本符合。 

摘要:将苏云金芽胞杆菌转座子Tn4430的解离酶识别位点res分别插入克隆载体pRSET B和pUC19得到质粒pBMB1201和pBMB1202。这两个质粒分别经BamHI/HindⅢ和EcoRI/HindⅢ双酶切回收含res位点的小DNA片段，与穿梭载体pHT3101经EcoRI/HindⅢ双酶切后回收的含大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因和红霉素抗性基因的3.3kb片段连接，获得重组质粒pBMB1203。封闭pBMB1203两res位点外的BamHI和EcoRI位点后，得到解离载体pBMB1204。将来源于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种YBT-1520的质粒复制起始区ori44片段插入pBMB1204的两res位点之间，得到解离穿梭载体pBMB1205。该解离载体插入壮观霉素抗性基因后电转化无晶体突变株，在辅助质粒所提供的解离酶作用下可发生解离消除抗性基因，解离频率为100%，解离后的质粒稳定性为93%。利用解离穿梭载体pBMB1205可在用抗性筛选到转化子后特定消除抗性标记基因和其它非苏云金芽胞杆菌DNA片段。

摘要:用巨引物PCR法介导的定点突变把猪α干扰素（PoIFNα）第86位Cys（TGC）突变为Tyr（TAC），同时将其成熟蛋白N端第一个密码子TGT同义突变大肠杆菌偏爱的密码子TGC，构建了大肠杆菌融合基因表达载体pGEXIFN，表达产物占菌体总蛋白的20%。将以包涵体形式表达的目的蛋白经变、复性处理，并以FPLC进一步纯化，得到了具有较高生物活性的产物(5200IU/mg)。

摘要:对比MNC和CD34⁺富集细胞在SCF+IL-3+IL-6+FL+Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性，发现：CD34⁺富集细胞具有很高的扩增潜力，在本实验条件下其总细胞持续扩增了8周，扩增倍数达31270.9±8640.5倍；而MNC在培养至第4周扩增就已呈现下降趋势，最大仅扩增了53.3±6.2倍。对比集落和CD34⁺细胞的扩增发现，MNC的集落密度和CD34⁺细胞含量由第0天至第7天有一个上升的过程，而CD34⁺富集细胞在培养过程中，集落密度和CD34⁺细胞含量却始终呈下降趋势。在体外培养过程中，CD34⁺富集细胞的CFU-GM和CD34⁺细胞最大分别扩增了185.7±14.1和191.7±188.8倍，明显高于MNC的12.4±3.2和50.6±33.2倍；而CD34⁺富集细胞和MNC的BFU-E则只实现了少量扩增，分别为7.2±5.2和10.1±3.4倍。结果显示，从CD34⁺富集细胞出发扩增造血干/祖细胞，可以得到更多的CD34⁺细胞和CFU-GM集落形成细胞。 

摘要:考察了不同甲醇流加策略对毕赤酵母高密度发酵生产水蛭素的影响。溶氧控制法不能有效地防止甲醇的过量流加。气相色谱离线检测法虽然防止了甲醇流加过量，但甲醇浓度的波动较大。利用甲醇传感器在线检测控制甲醇的流加可维持较恒定的甲醇浓度。在流加甲醇的同时，以限制性速率流加甘油可以增加表达期间的能量供应，提高产物的表达量。经优化后，采用甲醇甘油混合流加时细胞干重达到162g/L，水蛭素活性达到24×10⁴ATU/mL，即1.7 g/L。 

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摘要:基因表达的系列分析（SAGE）是探讨组织或器官在不同条件下基因表达丰度以及差异表达的一种有效方法。本文介绍了SAGE方法的详细机理并且对SAGE方法学的改进进行了综述。

摘要:综述了近10年来采用基因工程技术改良作物蛋白质、糖类、脂类营养成分研究的最新发展，尤其对作物蛋白质含量及氨基酸组分改良方面进行了详细描述；并简要介绍了基因工程食品可能存在的不安全性问题及解决的办法。