摘要:丙酮酸是一种重要的有机酸，广泛应用于制药、日化、农用化学品和食品等工业中。相对于化工法生产的丙酮酸而言，生物技术法生产的丙酮酸具有低成本、高质量等优势。生物技术法生产丙酮酸主要包括发酵法和酶法，前者又包括直接发酵法和休止细胞法。在对比各种生产方法的基础上，考虑到球拟酵母属的多重维生素营养缺陷型菌株是目前最具竞争力的丙酮酸生产菌，因此重点介绍了发酵法生产丙酮酸在菌种、发酵条件优化等方面的研究进展，并给出了生物技术法将来可能的发展方向。 

摘要:乳腺癌易感基因BRCA1（Breast cancer susceptibility gene 1）在乳腺癌的发生、发展中起重要作用。BRCA1 C末端含有2个BRCT结构域（BRCT1和BRCT2），许多乳腺癌易感突变发生在BRCA1的BRCT结构域中。利用染色质结构检测技术表明，BRCT结构域具有染色质伸展活性。本文利用缺失突变技术构建了6种BRCT1结构域（1642-1736 aa）缺失突变体并将BRCT1结构域中与染色质伸展相关的重要区域定位到1691-1721之间的氨基酸残基；用丙氨酸扫描技术构建了10种BRCT1结构域丙氨酸扫描突变体并将重要氨基酸残基序列定位到1707-1711之间的IAGGK。利用定位的重要区域进行Blast分析，结果找到一新型同源蛋白质。BRCT1结构域的定位有助于预测BRCT1结构域突变后发生乳腺癌的风险，也为进一步研究BRCT1结构域的功能机制提供了有用的材料。

摘要:头状链轮丝菌(Streptoverticillum caespitosus) ATCC27422是抗肿瘤药物——丝裂霉素A的产生菌，根据高GC含量革兰氏阳性菌染色体复制起始区两端基因序列的保守性，采用PCR方法从该菌中克隆了一段包含染色体复制起始区(oriC)的1.3 kb片段。序列分析发现，克隆片段与天蓝色链霉菌的oriC及邻近区域的同源性达80％以上；头状链轮丝菌oriC中含有22个DnaA-box，保守序列为TTGTCCACA。以克隆片段构建的质粒可以跨属转化变铅青链霉菌(S. lividans)ZX7，原生质体转化效率为3.2×10²个/μgDNA；质粒在S. lividans ZX7中能以低拷贝形式稳定存在；转化子的菌落和菌丝形态均正常。头状链轮丝菌oriC序列与几种链霉菌的oriC有较高的同源性，以及在变铅青链霉菌中仍具有复制起始活性等说明链轮丝菌属与链霉菌属在系统发生上关系较近；但采用最大似然法分析oriC序列构建的头状链轮丝菌与几种链霉菌的系统进化树表明，头状链轮丝菌与几种链霉菌之间的分化距离远大于链霉菌之间的分化距离。该证据支持链轮丝菌属的独立分属。

摘要:黑曲霉糖化酶高产菌株T21经紫外诱变后, 通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定筛选出胞外酸性蛋白酶活力仅为原株076%的菌株A.nigerT21-201，其生长特性和产糖化酶活力与原株基本一致。利用原生质体PEG法将含有报告基因vhb的表达分泌质粒Pgt10-vhb通过与选择标记质粒的共转化导入此蛋白酶部分缺陷株及其原株T21，检测在蛋白酶缺陷株Aspergillus niger T21-201 和原株T21中VHb的分泌表达，结果表明在A.nigerT21-201中VHb表达水平显著高于原株，但Northern blot却显示在两菌株中^vnb基因的转录水平近似，由此证明酸性蛋白酶缺陷对保护外源蛋白产生了显著效果。 

摘要:为探讨心钠素基因经体细胞转移对阿霉素诱导的肾病动物泌尿功能的影响及其治疗肾病的潜力，采用肌肉或静脉内直接注射裸DNA的方法，将人心钠素基因的逆转录病毒载体分别导入阿霉素肾病动物体内，以期为其提供持续性的心钠素来源。结果发现，人心钠素基因经肌肉和静脉内直接注射这2 种途径导入后，均可使阿霉素肾病动物的尿量/体重比明显增加，有效利尿作用时间大于15d。试验期间，实验组肾病动物的体重明显增长，血浆中的心钠素浓度在基因转移5d 后明显升高，但动物尿中的K⁺和Na⁺浓度无明显变化。以上结果说明，心钠素基因经肌肉和静脉2 种途径导入均可明显改善肾病动物的泌尿功能，具有治疗肾病的潜力。

摘要:比较大肠杆菌与脑膜炎奈瑟氏球菌的CMP-唾液酸合成酶的氨基酸序列，发现大肠杆菌CMP-唾液酸合成酶的保守区域主要位于N-端，其C-末端似乎对其催化活性没有作用。通过PCR方法，对大肠杆菌CMP唾液酸合成酶的C-末端进行了一系列截短，将得到的产物连接至表达载体pET-15b中，在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中表达。经IPTG诱导，发现从C-末端截去189个氨基酸酶仍有催化活性，说明大肠杆菌CMP唾液酸合成酶的最小活性域主要集中在N-末端的229个氨基酸。有催化活性的C-端缺失突变合成酶的比活、最适pH及热稳定性发生变化，提示被截去的C-端氨基酸残基虽不直接参与构成酶的催化活性中心，但可影响催化活性域的构象，从而对酶的催化活性与稳定性产生影响。 

摘要:为了研究和应用猪重组干扰素-γ（rPoIFN-γ）预防和治疗病毒性疫病，将大白猪PoIFN-γ基因插入到酵母整合载体pHIL-S1、构建了重组GS115工程菌（pHIL-S1/rPoIFN-γ）。经过SDSPAGE、Western blot分析和抗滤泡性口炎病毒（VSV）活性测定，证实rPoIFN-γ分子量为18 kD，在GS115中的表达量为18%；其抗VSV活性为450～540 u/mL。用rPoIFNγ处理猪肺巨噬细胞系Marc145后，经细胞病变抑制法（CPE50）测定，rPoIFNγ可以抵抗蓝耳病病毒（PRRSV）感染。结果显示酵母表达的rPoIFN-γ是有应用价值的抗病毒生物工程制剂。

摘要:用全长PCR方法从野生型苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）菌株S184中克隆了2.3 kb大小的vip3A基因并进行了序列分析。将vip3AS184基因插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP，转化大肠杆菌M15，转化子经1mmol/L IPTG诱导后可表达89 kD大小的Vip3A-S184蛋白，并得到Western blot证实。蛋白可溶性试验表明，目的蛋白中约有19%是可溶的，用透射电镜观察到大多数蛋白是以包涵体形式存在的。因此，可以在自然条件下进行目的蛋白的纯化和对家兔进行免疫制备多克隆抗体，用于苏云金杆菌Vip3A蛋白表达的检测。利用IPTG进行诱导培养的菌液对甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）、斜纹夜蛾(S.litura)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)等3种害虫的初孵幼虫进行生物测定，结果表明，Vip3AS184蛋白对夜蛾科害虫具有较高的杀虫活性。

摘要:构建的溶栓和抗栓双重功能的RGD-葡激酶突变体(RGD-Sak)在大肠杆菌中高表达，目的蛋白质以包涵体形式存在。为获得有活性的蛋白质，需要对包涵体进行变复性。利用凝胶层析方法对包涵体中RGD-Sak进行复性，并与稀释复性法进行比较，发现凝胶柱复性方法具有操作周期短、简便、成本低而高效等优点。复性后蛋白质用Q-Sepharose FF离子交换进一步纯化，纯度达95%，酪蛋白凝胶板活性测定表明两种复性法得到的蛋白质比活性相当。圆二色谱测定显示两种复性法得到的蛋白质的二级结构成份和谱形一致，说明在两种复性过程中完成了RGD-Sak分子的正确折叠。

摘要:根据日本血吸虫菲律宾株编码21.7kD蛋白的基因设计引物，以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板，用RT-PCR法扩增出大小为558bp的基因片段。经序列分析推断该基因片段为编码日本血吸虫中国大陆株21.7kD蛋白基因的完整阅读框，与菲律宾株该基因的碱基序列同源性为98%。将其克隆到表达载体pET28a(+)中，在大肠杆菌BL21中获得表达，融合表达产物分子量约为25.4kD。利用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对该表达产物进行Western印迹检测，在预测位置出现了明显的识别条带，说明该基因的表达产物具有抗原性。

摘要:PecE/PecF是层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基(α-PEC)生物合成的裂合异构酶。以4种脱辅基藻胆蛋白为底物，初步研究了PecE/PecF对底物蛋白的催化专一性。结果表明，PecE/PecF可催化藻蓝胆素(PCB)与高度同源的层理鞭枝藻不同亚种的α-PEC脱辅基蛋白的体外重组，也可催化经128位Trp定点突变到Phe而得到的α-PEC脱辅基蛋白的体外重组，但PecE/PecF对PCB与藻蓝蛋白α亚基(α-CPC)脱辅基蛋白的体外重组无催化作用。A-PEC脱辅基蛋白的重组不受表面活性剂Triton X-100的影响，而Triton X-100可改进PCB与α-CPC脱辅基蛋白的重组。

摘要:介绍了一种新型多组份生物微胶囊体系——SA/CS-CaCl₂/PMCG微胶囊。考察了PMCG和SA/CS-CaCl²/PMCG微胶囊体系对大肠杆菌和酿酒酵母生长的影响，并用SA/CS－CaCl²/PMCG生物微胶囊进行了固定化培养大肠杆菌和酿酒酵母的研究。结果表明，与其它合成聚阳离子类似，PMCG组分对细胞生长有明显的抑制作用，但是在制胶囊过程中以及在用SA/CS-CaCl²/PMCG微胶囊对大肠杆菌和酿酒酵母培养过程中，都显示了良好的生物相容性，因此作为整个体系来说，该微胶囊可用于微生物细胞的固定化培养。  

摘要:为构建苯丙氨酸脱氨酶的一种更新更高表达的基因工程菌，取得治疗高苯丙氨酸血症大鼠的更佳疗效。将欧芹PAL cDNA重组到质粒pNZ8048中，构建翻译融合载体和转录融合载体，分别转化乳酸乳球菌NZ9000。对两种高效表达菌株的酶活性差异进行比较，观察Nisin诱导的动态进程，并利用新鲜培养的p(NZ8048-PAL)₁/NZ9000工程菌进行了高苯丙氨酸血症大鼠(称PKU动物模型)的治疗实验。结果表明：（1）翻译融合型菌株具有更高的酶活性；（2）当Nisin的诱导时间达6h时, 产物肉桂酸生成量基本达到峰值；（3）给高苯丙氨酸血症大鼠灌喂新鲜培养的p(NZ8048-PAL)₁/NZ9000工程菌（翻译融合型）, 观察到该工程菌能显著降低模型动物血中Phe浓度，从而取得了更好的疗效。  

摘要:对表达人骨形成蛋白2成熟肽的基因工程大肠杆菌E.coli DH5α/pDH-B²m在500mL摇瓶中进行了培养条件的摸索实验，并在此基础上扩大至NBS Bioflo IV 20L发酵罐，利用溶氧反馈-分批补料培养技术：在培养过程中保持适当的溶解氧（40%），以溶氧值在线反馈控制搅拌速度及流加补料培养基，使细菌保持适当的比生长率，成功地进行了工程菌的高密度培养，最终菌体密度达OD₆₀₀=57，每升干菌量22.8 g，目的蛋白的表达量占细菌总蛋白的30%，人骨形成蛋白2成熟肽的理论产率达到3.59 g/L。 

摘要:采用二次正交旋转组合设计研究了蔗渣半纤维素水解过程中硫酸浓度与液/固比对木糖收率的影响。回归分析表明，这两个因素与木糖的收率之间存在显著的回归关系。通过回归方程优化水解条件，当硫酸浓度2.4g/L，液/固=6.2，在蒸汽压力2.5×10⁴ Pa的条件下水解2.5h，100g蔗渣可水解生成木糖约24g 。大孔树脂吸附层析处理蔗渣半纤维素水解物，能有效地减少其中的酵母生长抑制物含量，显著改善水解物的发酵性能。用大孔树脂在pH 2条件下处理过的蔗渣半纤维素水解物作基质，含木糖200g/L，产木糖醇酵母菌株Candida tropicalis AS2.1776发酵110h耗完基质中的木糖，生成木糖醇127g/L，产物转化率0.64（木糖醇g/木糖g），产物生成速率1.15g/L·h.  

摘要:在5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP071高产碱性蛋白酶的条件进行了研究，通过提高通气量和改变搅拌转速，BP071可在发酵40 h内达到产酶高峰，酶活力最高可达24480 u/mL。利用快速蛋白液相层析（FPLC）技术，建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE-A-50脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶，再经过CM-Sephadex-C-50、Sephadex-G-75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶，酶纯度提高了76.2倍。SDS-PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为28 kD。酶学性质研究表明，酶的最适作用pH为11，最适作用温度为60℃，具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca²⁺、Mg²⁺对酶的稳定性有促进作用，Hg²⁺、Ag⁺、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。SDS和Urea对酶的活力无影响。

摘要:对无溶剂非水相中癸酸与甘油的酶促酯化反应进行了研究，发现Pseudomonas fluoresces脂肪酶（PFL）、Mucor miehei脂肪酶（MML）和Candida antarictica脂肪酶（CAL）均有较好的催化活性。CAL酶促转化癸酸的最适反应条件为：60℃，加酶量为20～100u/g，初始加水量为甘油质量的12%。CAL的1，3位置专一性在最终产物中未表达。CAL酶催化剂的失活主要与机械磨损有关，反应5批次后酶活残留量为96.4%。敞开物系、真空脱水或分子筛脱水均为有效脱水方式。敞开物系中反应物量比不影响平衡转化率而会影响单甘酯平衡产率。用碳酸氢钠水溶液萃取可有效脱除产品中的残余癸酸，终产品酸价为0.68mg KOH/g。提高甘油比例并使用非脱水原料，无外加水结合部分流加癸酸的工艺，可以减少减压脱水或敞开反应的时间，5h后癸酸最高转化率可达96.9%。 

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摘要:挑选两个乳汁中人凝血因子IX（hFIX）表达量相差较大的转基因小鼠家系，分别用PCR、Southern blot、FISH和ELISA对两个家系中的小鼠进行检测。结果显示后代小鼠的转基因阳性率为50%左右；外源基因的整合是完整的，没有发现可见的丢失现象；家系中的各个小鼠表达量有差异，FIX-33家系中hFIX在乳汁中的表达量为（43.32±5.41）?g/mL；FIX-124家系中hFIX在乳汁中的表达量是（1.16±0.45）?g/mL。而两个家系之间的表达量则差异极为显著(P<0.01)。这表明原代转基因小鼠的遗传及表达特性可以得到稳定的传递。

摘要:本文综述了国内外关于血浆人血清白蛋白（pHSA）和基因重组人血清白蛋白（rHSA）分离纯化的进展和发展趋势。以冷乙醇沉淀为主的pHSA分离方法仍是目前多数工业采用的工艺，但近年来发展的离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等多种色谱分离技术具有自动化程度高、生产周期短、更符合GMP等特点，正在逐步取代传统的冷乙醇沉淀法。当前用基因工程技术表达的人血清白蛋白对分离纯化提出了新的挑战。为获得高纯度、安全、稳定的产品，各种色谱分离技术得到更多的应用，其中扩张床离子交换色谱可以省去离心、过滤等传统固液分离操作。尽管rHSA的纯化技术已有一定的发展，但纯化过程仍需进一步优化以提高产品纯度及收率。