摘要:单克隆抗体从问世到目前广泛应用于临床，经历了一段曲折的发展历程。其中人源化抗体是一个重要的里程碑，并伴随着一系列重大的技术革新，如PCR技术、抗体库技术、转基因动物等。人源化抗体的形式也从最初的嵌合抗体、改型抗体等逐步发展为今天的人抗体。抗体人源化已经成为治疗性抗体的发展趋势,同时各种抗体衍生物也不断涌现，它们从不同角度克服抗体本身的应用局限，也为治疗人类疾病提供了更多利器。对单克隆抗体进行改造使之应用于临床治疗，不仅需要对抗体效应机制进行更细致深入的研究，同时还有赖于对人类免疫系统调控机制的全面精确认识。

摘要:核基质结合序列（MAR）是能在体外与核基质特异结合的DNA序列，广泛存在于染色质Loop结构的边界序列中。随着研究的深入，发现MAR序列不仅在染色质折叠中起到重要作用，影响邻近内源基因表达，而且将MAR序列构建到外源基因表达盒两侧转化动植物时，也影响外源基因的表达。因此，MAR序列是基因组中一种重要的基因间边界序列，为阐明非编码序列在基因表达中的作用和构建真核生物高效表达载体提供了新途径。

摘要:绿色荧光蛋白(GFP)可直接进行活体观察，它的这个优点可被用于监测转基因植物中选择标记基因的消除。为此，构建了植物表达载体pGNG，将绿色荧光蛋白基因(gfp)和卡那霉素抗性基因表达盒(NosP-nptll-NosT)一起克隆在两个同向的lox位点间，在第一个lox位点上游置有CaMV 35S启动子以驱动GFP表达，第二个lox位点下游置有不含启动子的大肠杆菌β-葡萄糖醛酸酶(GUS)基因。首先在含卡那霉素(Kan)的培养基上筛选出转pGNG的烟草，借助绿色荧光可容易地检出表达GFP的转化体。然后用另一转化载体pCambia1300Cre二次转化表达GFP的转基因植物，利用另一选择标记基因潮霉素抗性基因(hpt)进行筛选，在获得的再生植株中，Cre重组酶的表达消除了转化体中两lox位点间的gfp和nptll。实验结果表明可借助GFP荧光的消失，快速选出nptII被消除的二次转化体，同时GUS(作为目的蛋白) 在CaMV 35S启动子驱动下获得表达。最后利用后代的分离将hpt和cre除去。

摘要:在大肠杆菌磷酸转移酶系统中，葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCB^Glc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsG基因缺陷株，有望降低葡萄糖的摄取速率，减少乙酸累积，促进菌体生长。运用PCR技术，扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源，中间为氯霉素抗性基因的DNA片段。经电转化，将外源DNA片段分别转入Escherichia coli DH5α、JM109中。在Red重组酶的作用下，外源DNA片段与染色体上同源区域重组，将基因ptsG敲除，构建ptsG基因缺陷株DH5αP、JM109P。在LB培养基中，ptsG基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异。在含有葡萄糖的LB培养基中，DH5αP、JM109P的最高菌密度分别是对照菌株DH5α、JM109的3.47倍和4.25倍，ptsG基因缺陷株对葡萄糖的摄入量也明显高于对照菌株。重组蛋白肿瘤坏死因子（TNF）在DH5αP、JM109P中的表达量分别占全菌蛋白的24.3%、20.8%，A600分别为8.28、7.62，TNF在缺陷株中单位体积的表达量明显高于对照菌株。以上结果说明，大肠杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力和表达外源蛋白的能力，在大肠杆菌高密度发酵研究方面具有良好的应用前景。

摘要:以本地山羊基因组DNA为模板,通过长链PCR扩增出山羊β-casein上游包括启动子，外显子1及部分外显子2的6.1kb的调控序列及下游3.3kb的序列，将来自质粒pCDNA3的neo基因以及来自质粒pNEOZTK-2的tk基因，经克隆重组后构建了本地山羊乳腺特异性定点打靶载体，并在其中克隆人乳铁蛋白mini基因，采用脂质体法转染小鼠乳腺上皮癌化细胞系C127，以进行打靶载体的表达功能检测，双夹心ELISA测得诱导液中乳铁蛋白表达量为0.2μg/mL，Western-blot显示重组蛋白分子量比标准品略小，约为76kD，结果说明本载体能够指导外源基因在动物乳腺细胞内正确表达。

摘要:构建TPO模拟肽与人IgG1Fc融合蛋白的酵母表达体系。利用PCR技术,从重组质粒pET28a-TMPFc中,扩增TPO模拟肽与人IgG1Fc 的DNA片段,连入pPICZαA酵母表达载体，电激法转化毕赤酵母。用MDH和MMH筛选具有正确表型的重组转化子，PCR、蛋白质印迹鉴定融合基因。MTT法鉴定TMPFc对Ba/F3mpl细胞生长的促进作用。构建的重组毕赤酵母实现了TMPFc的分泌表达，表达量占外分泌蛋白质的65%。表达蛋白质的相对分子量约64kD，对Ba/F3mpl生长具有促进作用。TMPFc酵母表达体系表达出可观的二价模拟肽，为二价TMP活性的定量研究奠定基础。

摘要:利用RT-PCR技术，从HeLa细胞的cDNA文库中扩增到人端粒结合蛋白1(hTRF1)基因编码区序列，克隆至pUCm-T载体，测序正确后，构建带His₆-tag原核表达载体pET-28c-TRF1，经IPTG诱导表达的His₆-TRF1融合蛋白分子量约为65kD，Western-blot证实表达产物可特异地与TRF1抗体sc-6165结合。用Ni^2＋NTA胶亲和层析纯化可得到电泳均一的融合蛋白，免疫新西兰纯种大白兔，获得特异性好的多克隆抗体，该抗体可用于免疫荧光染色和Western-blot方法检测哺乳动物细胞内源性的TRF1分子。

摘要:γ-亚麻酸（GLA）作为人体必需的不饱和脂肪酸，具有重要的营养和药用价值。Δ⁶-脂肪酸脱氢酶是γ-亚麻酸合成途径中的关键酶。为了在毕赤酵母中建立一种新的合成γ-亚麻酸的表达体系，将高山被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因与胞内表达载体pPIC3.5K连接，SacⅠ线性化后电击法转化毕赤酵母SMD1168，获得的转化子经PCR鉴定目的基因已整合到毕赤酵母的基因组中。用甲醇诱导表达，通过脂肪酸气相色谱和气相色谱质谱（GC-MS）联用分析表明高山被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中获得表达,γ-亚麻酸含量占总脂肪酸的16.26%。

摘要:以陆地棉（Gossypium hirsutum L.）品种TM-1开花后9d、21d、27d三个不同发育时期的棉花纤维为材料，利用mRNA荧光差异显示 (FDD) 技术，筛选到109个差异显示的cDNA片段。在此基础上，结合两轮反Northern杂交筛选和Northern杂交分析，获得了多个仅在棉花纤维细胞中特异表达或在纤维中优先表达基因的cDNA片段，序列测定和数据库搜索分析表明，这些cDNA片段中的多数还未有报道。本工作为克隆上述基因的全长cDNA，并进一步研究它们在棉纤维发育中的功能奠定了基础。

摘要:构建重组人淋巴毒素（rhLT）随机点突变组合文库以进行体外分子进化及结构和功能的研究。应用含随机核苷酸序列的引物，通过Overlap PCR的方法分别对rhLT 的46、106和130位氨基酸进行定点随机突变，获得各单点随机突变体库。通过基因操作将这三个单点随机突变体库拼接并克隆于Pmd_18T载体建立三点组合突变体文库，DNA测序鉴定突变位点的随机性和多样性，原核表达该变异体库，体外测定生物学活性。成功获得rhLT三点随机点突变组合文库，其转化克隆数达到1.5×10⁵，是多样性理论值的4.5倍。50个样品的序列分析显示各个位点的核苷酸和氨基酸序列的突变都呈随机性分布。对原核表达的30个样品进行生物学活性测定，结果70%(21个)的样品无活性、23.3%(7个)的样品活性低于rhLT、6.7%(2个)的样品活性高于rhLT。成功构建了rhLT随机点突变组合文库，该库不仅在一级结构上具有良好的随机性和多样性，而且具有生物学活性的多样性，为应用噬菌体展示等高通量筛选策略对淋巴毒素进行体外分子进化和结构与功能的深入研究打下了基础。

摘要:作为开发新型实用性人绒毛膜促性腺激素(hCG)疫苗的一种尝试, 我们已构建若干组合靶抗原三个线性B- 细胞表位和外源强T- 细胞表位的基因工程hCG嵌合肽。为了检测用这些嵌合肽免疫的动物血清中是否能产生抗各表位的三种抗体，本研究选用能在大肠杆菌中高表达和与生物素亲和性强且特异(方便通过亲和层析纯化)的链霉亲和素为载体，分别构建了三种含β-hCG不同单一线性B_细胞表位(β5,β9和β8)的融合蛋白。在链霉亲和素基因下游多克隆区EcoRⅠ和Hind Ⅲ位点插入各表位编码基因片段(带TAA终止密码子)的pTSA-18重组质粒, 转化BL21(DE3)pLysS宿主菌后, 它们在IPTG诱导下均能以较高水平表达各自目的融合蛋白,而且它们的表达产物在Western blot鉴定中都能被抗各表位特异的多抗或单抗或抗报告表位单抗识别。用改良的制备性PAGE方法可以一步纯化电泳均一性高于95%的三个融合蛋白, 它们的收得率相对1L培养物约为5 mg。作为化学合成表位肽的替代物, β-hCG三个单一B- 细胞表位融合蛋白的可获得性将有助于所构建hCG基因工程嵌合肽以及其他hCG疫苗，也包括它的DNA疫苗的免疫原性分析。

摘要:构建人鼻咽癌组织cDNA文库，以SEREX方法从cDNA文库中筛选鼻咽癌抗原基因。采用确诊鼻咽癌患者新鲜活检癌组织构建cDNA文库，测定原始文库滴度，进行蓝白筛选以确定文库的重组率。以建库组织来源患者的自身血清，采用“一对一” 的血清学方法筛选所构建的cDNA文库，阳性克隆经PCR检测鉴定后进行序列分析。经测定原始文库滴度为7.28×10⁶pfu/mL,含3.64×10⁶个重组子，重组率为94%，扩增文库滴度为3.8×10⁹pfu/mL,cDNA插入片段大小在0.5～3.0kb之间。文库经三轮血清学筛选共获得23个阳性克隆，分别代表了16个独立的cDNA插入片段（抗原基因）。其中10个与已知基因高度同源，另外6个基因与GenBank中已知基因的部分同源，其中有3个是新基因。利用SMART技术构建了高质量的人鼻咽癌组织cDNA表达文库，有利于以cDNA文库为基础的进一步的实验研究。应用SEREX技术初步筛选鼻咽癌组织cDNA文库，共得到16个鼻咽癌相关抗原基因，其中有3个是新基因，可能为鼻咽癌的免疫学研究提供新的研究分子。

摘要:通过SSH法获得了一个与不定根形成相关的差异表达的cDNA片段，其推导的氨基酸序列与拟南芥的生长素反应因子(ARF)类蛋白具有较大的同源性，因此将它命名为MiARF。用所设计的基因特异引物进行3′RACE扩增获得包含完整读码框架(ORF)的MiARF1（GenBank登录号为AY255705）和MiARF2（GenBank登录号为AY300808）。MiARF1全长为3272bp，其中，ORF含2523bp，5′非翻译区（5′UTR）含285bp, 3′非翻译区(3′UTR)含464bp。由该序列所推导的氨基酸序列与拟南芥ARF2（BAB10162）的ID值为64%， E值为0，在DNA结合区域（DBD）、III和IV区域的同源性更高，ID值均大于80%。MiARF2cDNA全长为1474bp，其中ORF含981bp，5′非翻译区含285bp, 3′非翻译区含208bp，由该序列所推导的氨基酸序列与拟南芥ARF2（BAB10162）的ID值为84%，E值为e-151。 MiARF2仅具有DBD保守区并与MiARF1的基本相同，但缺乏III和IV区域。Virtural Northern 杂交表明：MiARF2在生根的组织中表达水平高, 而在非生根的组织中未见表达；MiARF1在生根及非生根的组织中均有表达。

摘要:诱导表达重组工程菌Pbv/cpa408后，将表达菌体超声破碎，上清经80%饱和硫酸铵一次沉淀，经透析，上凝胶过滤层析柱进行分离纯化，薄层凝胶扫描结果显示，纯化的蛋白纯度达95%以上；用纯化蛋白免疫昆明小鼠，以1.0MLD100腹腔进行攻击，被免疫小鼠获得了100%的保护。

摘要:哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统。但在无蛋白培养基中，哺乳动物细胞生长活力差，且容易发生细胞凋亡，因而难以大规模培养。为解决此问题，应用双顺反子表达载体在CHO-dhfr-细胞中同时表达Igf-1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合，通过Bcl-2使细胞获得抗凋亡能力；通过Igf-1或Cyclin E促进细胞生长分裂，使细胞获得在无蛋白培养基中生长的能力。以上述基因组合转染CHO-dhfr^-细胞，应用Western blot从G418抗性克隆中分别筛选到Bcl-2高表达克隆若干个，对其中表达Bcl-2最高的CHO-IB3和CHO-BC1做进一步Western blot和流式细胞分析，确认此两个细胞株分别高表达Igf-1/Bcl-2和Bcl^-2/Cyclin E基因组合。分别通过撤去血清和加入放线菌素D诱导细胞凋亡，并以流式细胞术和DNA Ladder法检测细胞凋亡，证明CHO-IB3和CHO-BC1均具有较强的抗细胞凋亡能力。MTT法证明两个细胞株在不含血清的IMDM培养基中的增殖活力显著高于CHO-dhfr-对照细胞。在细胞培养瓶中的连续培养实验表明，CHO-IB3和CHO-BC1在本实验室设计的IMEM无蛋白培养基中的生长速度和活细胞数显著高于CHOdhfr-对照细胞。提示此两个细胞系能够在无血清培养基中抗凋亡高活力生长，适于作为生物工程宿主细胞。

摘要:研究已证实杆状病毒可进入某些哺乳动物细胞，这提示了可将重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体。利用已构建的重组杆状病毒BacV-CMV-EGFPA，以含病毒的Sf9细胞培养上清同时孵育多种哺乳动物细胞，利用流式细胞术检测报告基因在不同细胞株中的转移效率及表达效率。共使用了20种哺乳动物细胞株，其中有12种人类组织细胞，7种小鼠组织细胞，1种猴组织细胞。实验结果显示携带CMV启动子的重组杆状病毒可有效进入多数哺乳动物细胞，其中对人、猴来源细胞的基因转移效率显著高于对鼠源细胞，对贴壁细胞的基因转移效率显著高于对悬浮细胞。同时，通过脂质体LipofectAMINE将携带有CMV启动子和EGFP基因的哺乳动物细胞表达质粒pCDNA3-1-EGFP分别转染部分特别是被认为杆状病毒进入能力较低的细胞株，结果显示CMV启动子在这些细胞中均可有效引导EGFP基因的表达，因此认为携带了CMV启动子的重组杆状病毒对不同哺乳动物细胞基因转移效率能基本反映出杆状病毒对不同种哺乳动物细胞的进入能力。通过综合比较携带CMV启动子的杆状病毒对不同种属及组织来源细胞的基因转移及表达效率，可看出杆状病毒对灵长类动物贴壁细胞的基因转移及表达效果是较好的，而对小鼠来源的细胞及悬浮培养细胞却并不十分理想，这表明将重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的基因转移工具，仍有其局限性，不一定对所有的细胞都合适，在应用时应予以充分考虑。

摘要:高效表达高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的一个有效途径。对源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因appA，按照毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子的偏爱进行了密码子优化改造。该改造后的基因appA-m按正确的阅读框架融合到毕赤酵母表达载体pPIC9上的α-因子信号肽编码序列3′端，通过电击转化得到重组转化子。对重组毕赤酵母的Southern blotting分析证实植酸酶基因已整合到酵母基因组中，并确定了整合基因的拷贝数。Northern blotting分析证实植酸酶基因得到了正常转录。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明，植酸酶得到了高效分泌表达，在5L发酵罐中植酸酶蛋白表达量达到2.5mg/mL发酵液, 酶活性(发酵效价)达到7.5×10⁶IU/mL发酵液以上, 大大高于目前报道的各种植酸酶基因工程菌株的发酵效价。

摘要:对重组人核苷二磷酸激酶A（rhNDPK-A）进行纯化，并对重组产物的理化性质及在溶液中的聚合状态进行鉴定。NDPK-A工程菌发酵后的菌体高压匀浆，然后微孔过滤、超滤浓缩，所得样品经DEAE阴离子交换、Cibacron Blue亲和层析、分子筛层析三步纯化后，以SDS-PAGE和RP-HPLC分析纯化产物的纯度，RP-HPLC测定酶活性。合格制品以基质辅助激光解析飞行时间质谱测定相对分子质量（MW）；Edman降解法测定N末端序列；多角度激光散射法测定重组产物在溶液中的表观分子量。结果表明，rhNDPK-A纯化产物的SDS-PAGE纯度为97.3%，RP-HPLC纯度为99.2%；比活性为（900±100）u/mg；单体相对分子质量为17017，与NDPKA分子量理论值相差132。测序结果表明，rhNDPK-A N末端缺失Met残基，其理论分子量为17017，与飞行质谱测定结果完全一致。表观分子量测定结果表明，rhNDPK-A在溶液中形成六聚体，表观分子量为102kD。上述结果说明， NDPK-A重组产物具与天然产物相同的自发形成六聚体性质，这为NDPK-A新药开发和机理研究打下了良好基础。

摘要:为了探讨戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体形成的关键区域和相互作用结构域，以及二聚体形成与主要天然中和表位的形成之间的关系，通过末端缺失、定点突变技术研究戊型肝炎病毒（HEV）ORF2的aa394-aa606片段NE2的聚合现象，发现其C端的aa597-aa602（AVAVLA）疏水区是该片段同源聚合的核心区域，提高该区域氨基酸的亲水性将妨碍聚合现象的发生；半胱氨酸化学交联实验表明NE2形成同源二聚体时，aa597在空间位置上相接近，处于可生成化学键的距离，提示所处区域为疏水聚合的作用结构域；通过Blast程序估算核心区域的天然突变率，发现其疏水性高度保守；N端缺失实验表明，至少65个氨基酸既不影响同源聚合也不直接参与主要的天然中和表位的形成，但可协助中和表位构象的形成，而这种协助作用可被ORF2的末端肽段所代替。Aa597-aa602（AVAVLA）疏水区为戊肝病毒衣壳组装的第一步骤的核心区域，并与重要的天然中和表位的形成直接相关，从而为戊肝病毒疫苗的研究提供更详细的信息。

摘要:β₂-微球蛋白(β₂m)是主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子的轻链部分, 为制备MHC-Ⅰ类分子四聚体的必要成分。 根据已报道的序列设计特异引物, 利用RT-PCR方法从人白细胞中克隆了β₂m基因, 并构建了成熟β₂m的原核表达载体, 在大肠杆菌中得到高效表达。 表达的β₂m大部分在包涵体中，经洗涤、变性和复性，并以强阴离子交换柱层析纯化，获得SDS-PAGE纯的人重组β₂m，Western印迹法分析表明该蛋白具有与抗人天然β₂m抗体反应的特性。此工作为制备MHC-Ⅰ类分子四聚体奠定基础。

摘要:长期以来，如何提高酶蛋白的热稳定性是分子生物学、生物工程学、化学工业等所关注的重要研究课题之一。分析了多种无机离子、糖和氨基酸对枯草杆菌液化型α-淀粉酶热稳定性的影响以及它们的共存效应，获取了一些对相关研究领域具有理论参考和实际应用价值的实验结果。在无机盐中，1mmol/L的钙离子或50mmol/L的钠离子能显著地提高该酶的热稳定性；酸性氨基酸和碱性氨基酸表现出相反的结果：酸性氨基酸具有明显的增强作用，碱性氨基酸却使之降低；随着糖浓度的增加（0～1000mmol/L），该淀粉酶的热稳定性呈线性增高；当钠离子或钾离子与某些氨基酸或糖类共同存在时，对该淀粉酶的热稳定性表现出了明显的协同作用。试图通过检测酶蛋白分子荧光强度改变来反映该酶的热稳定性变化，其结果是：随着温度的改变，酶蛋白的荧光强度的衰减与残余酶活性之间显示了良好的相关性。从而说明热环境使酶蛋白分子的螺旋结构发生变化而失活，某些溶质的存在可能是通过作用于蛋白质分子的立体结构而影响该酶的热稳定性。

摘要:椭偏光学生物传感器是在椭偏光学显微成像技术的基础上发展的一项生物传感技术。它能够直接观测固体表面上的生物分子面密度，毋需任何标记辅助，适合发展成为一种无标记免疫检测技术。研究了在硅片表面上通过A蛋白定向固定抗体分子用于椭偏光学生物传感器免疫检测的可能性。实验结果表明，通过A蛋白固定抗体得到的抗体膜层的均一性和固定量的重复性能够保证椭偏光学生物传感器免疫检测结果的质量。通过A蛋白定向固定的抗体的抗原结合位点趋向一致，显著提高了抗体与抗原结合的能力。此外，通过蛋白A固定的免疫球蛋白G分子能够结合更多的多克隆抗体分子说明通过A蛋白固定的蛋白质分子能够较好地保持其空间构象。

摘要:在维生素限制的条件下，研究了添加TCA循环中间产物对光滑球拟酵母多重维生素营养缺陷型菌株CCTCC M202019生长和积累丙酮酸的影响。该菌株能以TCA循环中间产物为唯一碳源进行生长，且在以葡萄糖、乙酸和TCA循环中间产物为复合碳源的平板上菌落数高于分别以葡萄糖和乙酸或TCA循环中间产物为唯一碳源时的菌落数。与其它TCA循环中间产物相比，草酰乙酸更能促进细胞的生长、提高丙酮酸产量和对葡萄糖的得率。草酰乙酸能够促进细胞生长，是因为T. glabrata CCTCC M202019菌株能够利用乙酸作为乙酰辅酶A供体。在含有100 g/L葡萄糖和6 g/L乙酸钠的培养基中再添加10 g/L草酰乙酸进行分批发酵实验，可使菌体浓度从11.8 g/L提高到 13.6 g/L，增长幅度为15%；丙酮酸对葡萄糖的得率(0.66 g/g)以及生产强度(1.19 g·L^{-1<、sup>·h-1<、sup>)分别高出6%和24%，使发酵结束时间提前8～12h。}

摘要:通过基因枪粒子轰击和草丁膦（PPT）选择获得可育的玉米转基因植株，并分析了外源基因在转化体中的拷贝数与启动子之间的关系。用玉米Ubi-1启动子驱动外源基因，玉米转化体中外源基因的拷贝数较低；可能的原因为Ubi-1启动子通过与其内部同源序列发生重组而被定点整合进玉米基因组，共转化的两种质粒DNA在整合至玉米染色体DNA之前已重构成为一个整体。结果显示使用某一植物自身基因的启动子可以降低外源基因在该物种转基因个体中的拷贝数，进而避免基因沉默现象的发生。目前已得到第二代转基因玉米种子。

摘要:构建了重组双功能水蛭素 ( Recombinant-RGD-Hirudin、 r-RGD-Hirudin ) cDNA 的表达质粒 RGD-Hirudin-pPIC9K，转化入毕赤酵母中，经筛选得到高表达的阳性克隆。种子菌经过3d发酵培养，其培养液上清经超滤浓缩、凝胶过滤层析和离子交换层析后，得到纯度大于97%、比活性为 12000 ATU/mg 的 r-RGD-Hirudin，回收率大于60%，发酵产率为 1 g/L。纯化后的 r-RGD-Hirudin 经过还原SDS-PAGE，抗凝血酶活力分析、抗血小板聚集分析、质谱分析及等电聚焦分析等方法鉴定，证明该表达产物为水蛭素的衍生物，具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重功能。

摘要:将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中，构建N基因克隆重组质粒，进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD/Thio TOPO表达载体，经PCR限制性内切酶分析、测序鉴定，筛选获得N基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆，成功构建了水泡性口炎病毒N基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达，可稳定、高效地表达N蛋白抗原。SDS-PAGE、Western blotting及间接ELISA试验结果表明，表达蛋白为融合蛋白，质量约63.5 kD，其表达产量约占菌体总蛋白的16％，相当于92mg/L。融合蛋白中含有水泡性口炎病毒群特异性的核蛋白抗原，应用表达的VSV核蛋白抗原建立了酶联免疫吸附试验，通过对186份山羊、豚鼠实验动物人工感染VSV的血清样品和参考血清样品的检测，并与微量血清中和试验进行了比较，结果表明：以表达的VSV核蛋白为包被抗原的酶联免疫吸附试验是一种特异性强、敏感性高、快速、简单、安全的检测方法，抗原制备成本低。

摘要:从ConA刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素2（ChIL-2）基因编码区。将该编码区Cdna序列和调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子（PE/L）的基因片段定向克隆到鸡痘病毒转移载体p1175中，获得重组转移载体P1175il2，然后转染已感染鸡痘病毒282E4疫苗株（wt-FPV）的鸡胚成纤维细胞（CEF），质粒P1175il2与wt-FPV基因组DNA发生同源重组，产生了表达ChIL-2的重组鸡痘病毒Rfpv-IL2。通过在含X-gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑，获得并纯化重组鸡痘病毒Rfpv-IL2。应用XTT/PMS方法检测的Rfpv-IL2 （M.O.I 2.0）感染CEF 72小时后细胞上清中表达的重组ChIL-2生物活性，效价为3.6×105u/Ml，表明Rfpv-IL2能有效地表达ChIL-2。下一步将利用Rfpv-IL2在体内表达ChIL-2，研究ChIL-2的免疫增强作用及其作用机理。