• 2006年第22卷第2期文章目次
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    • 人血清白蛋白和人干扰素α2b的融合蛋白在毕赤酵母中的表达

      2006, 22(2).

      摘要 (1898) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3240) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了延长IFNα2b在血浆中的半衰期,构建了编码HAS和hIFNα2b的融合基因并在毕赤酵母中获得高效表达,工程菌经5L发酵罐培养后获得的含融合蛋白的培养液经超滤浓缩、蓝色葡聚糖凝胶层析、疏水柱层析以及阴离子柱层析,融合蛋白的纯度达到95%以上。该融合蛋白能与干扰素抗体和人血清白蛋白抗体结合,并表现出与重组干扰素α2b相似的抗病毒活性。以猕猴为动物模型,分别从静脉和皮下单剂量给药,给药浓度为90μg/kg时,在336h后血浆中仍可检测到融合蛋白。其静脉注射的血浆半衰期为101h,皮下注射的半衰期为68.2h。皮下注射的生物利用度为67.9%。IFNα2b与HAS融合后,明显的延长了血浆半衰期,显现了其良好的临床应用前景。

    • Ssp dnaB蛋白质内含子介导的重组人脑钠素的制备

      2006, 22(2).

      摘要 (1602) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3398) 评论 (0) 收藏

      摘要:脑钠素 (BNP) 是临床治疗代偿失调性心衰竭的有效药物。将脑钠素与组氨酸标签 (His-tag) 以及具有自我剪切功能的Ssp dnaB微型蛋白质内含子进行融合表达。表达产物经Ni-Sepharose亲和层析及体外复性处理后,用CM-纤维素对复性产物进行了浓缩,并通过改变CM-纤维素柱内的pH及温度,诱导Ssp dnaB微型蛋白质内含子的剪切作用,使脑钠素从融合蛋白中释放并与载体蛋白 (His-DnaB) 分离,再经C4反相高效液相色谱法进一步纯化后,从每升培养液中获得了2.8mg纯度达97%的重组人脑钠素。体外活性测定结果表明,重组人脑钠素对兔胸主动脉条具有显著的血管舒张效应,其EC50为1.94×10-6mg/mL。

    • 使用偏爱密码子大幅度提高苯丙氨酸脱氨酶在食品级乳酸乳球菌中的表达

      2006, 22(2).

      摘要 (1627) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3225) 评论 (0) 收藏

      摘要:为获得苯丙氨酸脱氨酶(PAL)在食品级乳酸乳球菌中的高效表达,将欧芹palcDNA(palnat)及根据乳酸乳球菌偏爱密码子设计人工合成的pal基因(palart)重组并转化到两种乳酸乳球菌NICE诱导表达系统中,测定基因工程菌表达PAL酶的量及活性,对比分析密码子偏爱性对乳酸乳球菌表达外源蛋白的影响。结果表明:在两种乳酸乳球菌NICE表达系统中,使用偏爱密码子均可显著提高PAL酶的表达效率,使NZ9000/pNZ8048表达系统表达量提高22.23倍, NZ3900/pNZ8149系统提高35.90倍。此研究获得了安全高效表达PAL,可用于治疗苯丙酮尿症的基因工程菌。

    • 双启动子对重组溶源性枯草杆菌中外源蛋白表达的增强作用

      2006, 22(2).

      摘要 (1536) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3698) 评论 (0) 收藏

      摘要:探讨了双启动子对基于溶源性噬菌体构建的重组枯草杆菌中外源蛋白表达的影响。分别将不含或含有本身启动子的α-淀粉酶基因 (来源于Bacillus amyloliquefaciens) 和青霉素酰化酶基因 (来源于Bacillus megaterium)克隆到溶源性枯草杆菌中,得到重组菌B. subtilis AMY1, B. subtilis AMY2, B. subtilis PA1以及B. subtilis PA2。由于同源重组,所克隆的片段整合到溶源性枯草杆菌中的噬菌体基因组上,并处于噬菌体强启动子的下游。在重组菌AMY1和PA1中,在热诱导的情况下外源基因的转录只受到噬菌体启动子的作用,而在重组菌AMY2和PA2中,在热诱导下外源基因的转录同时受到噬菌体启动子和基因本身所带启动子的作用。双启动子的应用使重组α-淀粉酶的表达量提高了133%,使重组青霉素酰化酶的表达量提高了113%。

    • qa-3稀有密码子和mRNA结构改造及其在大肠杆菌中的高效表达

      2006, 22(2).

      摘要 (1805) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2570) 评论 (0) 收藏

      摘要:奎尼酸脱氢酶的高表达是奎尼酸生物合成的代谢工程研究的关键和基础。粗糙脉孢菌基因组中编码奎尼酸脱氢酶的基因qa-3在大肠杆菌中不表达,根据大肠杆菌密码子使用频率分析qa-3基因,发现有27个稀有密码子,其中编码Arg?的有8个,编码Gly(G)的有9个。编码精氨酸的AGG(AGA) 两个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有个相对比较集中的GGG密集区G区。进一步通过计算机分析其qa-3基因mRNA二级结构,发现改变5′和3′末端个别碱基对其二级结构的影响很大,可以使mRNA的自由能由野生型的-374.3 kJ/mol降低到最小-80.5 kJ/mol,从而大大减少mRNA两端二级结构的产生,而仅仅改变R区和G区的稀有密码子自由能变化很小。通过对该基因密码子改造和优化5′和3′末端对其mRNA二级结构的影响,在大肠杆菌中表达真菌的基因qa-3,并测到了奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌株奠定基础。

    • 无选择标记和载体骨干序列的Xa21转基因水稻的获得

      2006, 22(2).

      摘要 (1303) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3197) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用双右边界T-DNA载体通过根癌农杆菌介导法将水稻白叶枯病广谱抗性基因Xa21导入杂交稻重要恢复系C418中。T0代共获得27个独立转基因株系,通过田间抗性鉴定与PCR分析,有17个株系的Xa21基因分子鉴定为阳性,且对白叶枯病原菌P6生理小种具有抗性。通过对17个株系的后代植株进行田间抗性鉴定,分子标记辅助选择及Southern杂交分析,结果显示4个株系的T1代植株中能分离出无潮霉素标记基因的Xa21转基因植株。无选择标记Xa21转基因株系的获得率为15%。PCR检测还表明,这些无选择标记的Xa21转基因植株不带有载体骨架序列。通过对转基因后代进一步的抗性鉴定与PCR辅助选择,获得了无选择标记和载体骨架序列的转基因Xa21纯合的抗白叶枯病水稻。

    • 利用基因枪法将Tagsk1基因导入敏盐小麦成熟胚愈伤组织提高其耐盐性的研究

      2006, 22(2).

      摘要 (1377) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2663) 评论 (0) 收藏

      摘要:以Tagsk1(Triticum asetium L. glycogen synthase kinase1)基因的cDNA的碱基序列为基础,设计特异引物由小麦耐盐突变体RH8706-49基因组DNA进行扩增后,得到来自于基因组的Tagsk1基因。采用基因枪法,利用携带该基因的双元表达载体pBI121-gsk1转化敏盐小麦H8706-34和中国春的成熟胚愈伤组织,经Kanamycin和0.5%NaCl筛选获得耐盐愈伤组织。这些被转化的愈伤组织表现出较高的耐盐性,并且能够在含盐培养基上进一步分化出根和芽。

    • 毕赤酵母表达HWTX-Ⅰ的不均一性分析

      2006, 22(2).

      摘要 (1581) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2287) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了寻找毕赤酵母表达虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX-Ⅰ)时产生不均一性表达产物的原因,应用阳离子交换层析、反相HPLC、Tricine SDS_PAGE电泳、质谱等技术,对基因工程菌Pichia pastoris GS115/HWTX-Ⅰ表达的不均一产物进行了分离、纯化和鉴定,并对不均一产物的N端和C端进行测序,结果表明:表达产物的不均一性主要体现在重组HWTX-Ⅰ的N端信号肽加工的不完全以及C末端的内部降解。生物学活性分析表明该不均一产物的活性仅为天然HWTX-Ⅰ活性的30%。同时,对如何避免不均一性表达产物的产生提出了相应的对策。

    • VEGF重组质粒pcDNA/V的构建及其在大鼠急性心肌缺血模型中的表达

      2006, 22(2).

      摘要 (1294) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3564) 评论 (0) 收藏

      摘要:构建人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)真核表达载体,并研究其在细胞水平和大鼠急性心肌梗死动物模型中的表达。利用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增人VEGF165基因,构建真核表达载体pcDNA/V。应用脂质体介导的基因转移技术,将pcDNA/V转染至人胚肾细胞(293细胞)中,经G418筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆。ELISA、Western blot检测证实重组质粒pcDNA/V能在293细胞中高效表达外源VEGF基因,鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验证实表达产物具有促血管生成的活性。进一步的体内表达研究,建立大鼠急性心肌梗死模型,将重组质粒pcDNA/V、空质粒pcDNA31(+)分三点注射于梗死交界处心肌内,四周后取材。经免疫组化染色检测,pcDNA/V组在梗死交界区有VEGF阳性表达;电镜观察显示,pcDNA/V组在梗死交界处心肌细胞间有大量毛细血管内皮细胞增生。实验结果表明:成功克隆了人VEGF165基因,构建了其真核表达载体。体内、外表达研究证实重组质粒的表达产物具有促血管生成的生物学活性,为VEGF基因治疗缺血性心肌病的研究提供实验基础。

    • 人LNα4LG4-5在毕赤酵母中的表达研究

      2006, 22(2).

      摘要 (1355) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2250) 评论 (0) 收藏

      摘要:为实现人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(Human Laminin Alpha4 Chain LG4-5 Module,hLNα4LG4-5)蛋白的分泌表达,采用DNA重组技术将hLNα4LG4-5 cDNA片段插入分泌型酵母表达载体pPICZαA中,构建了相应的重组表达质粒pPICZαALG45并在GS115毕赤酵母菌株中表达,纯化蛋白后进行细胞学实验证明,hLNα4LG4-5有明显促进肿瘤细胞粘附和扩展的作用,为深入研究LG4-5组件结构与功能奠定了基础。

    • 禽流感病毒H5HA、H7HA、H9HA亚型血凝素基因在毕赤酵母中的表达

      2006, 22(2).

      摘要 (1327) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2518) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用毕赤酵母表达系统进行了禽流感病毒H5HA、H7HA及H9HA亚型血凝素基因的真核表达研究。首先将H5HA、H7HA及H9HA基因片段分别插入酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K_H5HA、pPIC9K_H7HA和pPIC9K_H9HA;再将所获重组质粒分别经SacⅠ、BglⅡ及SalⅠ线性化后,电转化GS115感受态细胞,以插入/替换的方式进行重组,并经MD平板与MM平板筛选,及PCR鉴定,得到重组酵母工程菌GS115/pPIC9K_H5HA、GS115/pPIC9K_H7HA及GS115/pPIC9K_H9HA;用甲醇诱导分泌表达目标蛋白。经SDS_PAGE和Western_blotting检测,结果表明,H5HA、H7HA及H9HA蛋白在毕赤酵母中均获得表达。酵母表达了上述目的蛋白,可直接进行抗原检测,并可用于抗体检测试剂盒及亚单位疫苗制备的辅助研究。

    • 超耐热酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在酵母细胞中的表达

      2006, 22(2).

      摘要 (1700) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3040) 评论 (0) 收藏

      摘要:用PCR方法扩增来源于极端嗜热厌氧古菌Pyrococcus furiosus中的超耐热酸性α-淀粉酶的结构基因,将该结构基因引入载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9KAmy转化大肠杆菌DH5α细胞,测序结果表明,克隆到的α_淀粉酶结构基因为1305bp,其编码的成熟肽为435个氨基酸。将正确构建的重组质粒转化毕赤酵母GS115细胞,得到酵母工程菌株。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,超耐热酸性α-淀粉酶在甲醇酵母中大量表达并分泌到胞外,该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导,随着诱导培养时间的增加,在培养基上清液中的单位体积酶活力相应上升,在诱导培养7d后酶活力达到最大值。该酶最适反应温度为90~100℃,最适反应pH值为4.5~5.5。该酶具有非常好的温度稳定性,在100℃条件下热处理5h,仍具有60%以上的酶活力。该酶的这些优点使其非常适于在工业生产上应用。

    • 人生长激素慢病毒载体的构建及其在鼠骨骼肌成肌细胞中的表达

      2006, 22(2).

      摘要 (1378) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2951) 评论 (0) 收藏

      摘要:构建能表达人生长激素(hGH)的pLentivirus6/V5_hGH载体,并实现hGH基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的表达。体外培养SD鼠骨骼肌成肌细胞,并通过免疫组织化学方法鉴定所得细胞、用台酚兰染色确定培养细胞的活性并绘制生长曲线。将目的基因hGH亚克隆到真核细胞表达载体pLenti6/V5-D-TOPO 载体上,构建重组质粒pLentivirus6/V5-hGH。将pLenti6/V5- hGH及阳性对照质粒pLenti6/V5_EGFP分别用Lipofectamin 2000介导转染体外培养的SD乳鼠骨骼肌成肌细胞。在激光共聚焦扫描显微镜下计数,确定阳性对照质粒的转染数,从而估计该基因的转染效率。加入筛选试剂以获得稳定表达异源生长激素(GH)的成肌细胞。收集转染及筛选后的细胞培养基,用放射免疫分析法(RIA)检测重组人生长激素(rhGH)的表达水平。聚合酶链式反应法(PCR)及DNA测序显示hGH基因成功地插入到pLenti6/V5-D-TOPO 载体中;阳性对照质粒转染细胞24 h后,在激光共聚焦显微镜下观察,其转染效率达40%以上。检测收集的上清,与对照组相比,有极显著差异(P<0.01),观察至第8周,rhGH仍持续稳定表达。通过检测培养的chang-liver肝细胞上清中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的水平,验证了rhGH的生物学活性。实验通过培养高纯度的成肌细胞,构建了能在真核细胞内表达hGH的重组质粒pLenti6/V5- hGH,实现了hGH基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的表达,并且获得的rhGH具有较强的促进肝细胞分泌IGF-1的能力。

    • 利用枯草芽孢杆菌ytkAywoF基因启动子与信号肽重组分泌表达mpd基因

      2006, 22(2).

      摘要 (2603) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3313) 评论 (0) 收藏

      摘要:用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pNW33N和去除了信号肽编码序列的成熟mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。用该探针从质粒pMPDP3和pMPDP29上克隆来自于枯草芽孢杆菌ytkAywoF基因上游的启动子功能片段,构建了穿梭表达载体pNYTM和pNYWM。将表达载体pNYTM和pNYWM转入枯草芽孢杆菌1A751获得表达菌株1A751(pNYTM)和1A751(pNYTM),mpd基因在ytkAywoF基因的启动子和信号肽的带动下实现了分泌表达且具有天然活性,结果表明ytkA基因的启动子强度强于ywoF基因的启动子。利用ytkA基因的强启动子和nprB基因的分泌型信号肽编码序列构建了新的穿梭分泌表达载体pYNMK,并使mpd基因在枯草芽孢杆菌WB800中得到了更高水平的分泌表达,表达菌株WB800(pYNMK)在培养到第84 h时甲基对硫磷水解酶酶活达到最高值为10.40 u/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的10.8倍,重组表达产物有91.4%分泌在培养基中。

    • 秸秆质外体蛋白对纤维素酶活力的影响

      2006, 22(2).

      摘要 (1516) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2991) 评论 (0) 收藏

      摘要:研究了玉米秸秆在储存过程中质外体蛋白含量的变化情况,及其对Penicilllum expansum 纤维素酶活力的影响。结果表明:随着储存时间的延长,可抽提的玉米秸秆质外体蛋白的数量逐渐减少,与P. expansum 纤维素酶的协同作用也随之减弱。储存玉米秸秆质外体蛋白没有内源性纤维素酶活力,而新鲜玉米秸秆有内源性EG活性,但它的稳定性较差,储存半年后基本降解或失活。储存秸秆质外体蛋白对FPA酶活力、棉花酶活力、β-葡萄糖苷酶活力有明显的增效作用,最大增效分别达到9532%、102.06%和96.6%。而对CMCase却表现出抑制作用,最大抑制率为49.52%,质外体蛋白-EG-βG表现出明显的协同关系,而它对CBH酶活力没有影响。消除内源性EG的影响后,新鲜玉米秸质外体蛋白对FPA活力、棉花酶活力、β-葡萄糖苷酶活力的促进率,以及CMCase的抑制率均高于储存秸秆的质外体蛋白。可见质外体蛋白是天然纤维素酶解研究不可忽视的影响因素。

    • 蓝光作用下黑曲霉形态发育与消减文库的分析

      2006, 22(2).

      摘要 (1610) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2545) 评论 (0) 收藏

      摘要:以持续黑暗培养为对照,采用扫描电镜观察了蓝光对黑曲霉孢子发育的影响,结果表明蓝光处理使菌丝粗壮,孢囊增大。以黑暗培养至36h再经蓝光处理3~4h的菌丝为实验组,对应时间段的黑曲霉菌丝为对照组,采用抑制性消减杂交(SSH)方法,构建了蓝光作用下黑曲霉的差异表达基因的cDNA文库。阳性克隆菌落经PCR扩增出200~500bp差异表达基因的cDNA片段,对序列进行同源性分析后发现两个差异表达的未知基因片段,为进一步研究蓝光诱导下黑曲霉差异表达的未知基因的功能提供依据。差异表达的基因片段大都与黑曲霉线粒体氧化还原酶类同源;荧光定量PCR分析结果表明所选取的部分差异基因片段在蓝光诱导下表达量均有提高。

    • 补加前体L-蛋氨酸对高密度发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸的影响

      2006, 22(2).

      摘要 (1695) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3445) 评论 (0) 收藏

      摘要:将高密度发酵技术成功应用于S-腺苷-L_蛋氨酸的生产。考察了补加前体L-蛋氨酸的量以及补加策略对酿酒酵母G14发酵生产S_腺苷_L_蛋氨酸的影响。实验发现补加前体L_蛋氨酸能明显促进S-腺苷-L-蛋氨酸的积累。同时还发现不同的补加策略对菌体浓度以及S-腺苷-L-蛋氨酸的产量和浓度有不同的影响。确定了补加L-蛋氨酸不应低于0.7g/10g菌体干重。比较了五种不同的补加前体L-蛋氨酸的方式。结果表明在菌体干重达到高密度的情况下(120g/L)补加前体L_蛋氨酸进行转化生产S-腺苷-L-蛋氨酸能达到比较好的效果:一次性补加9g L_蛋氨酸,SAM的积累量在补加后的18h达到最高,为431g/L;采取流加方式补加L_蛋氨酸,流加速率为2g/h,共流加5h,流加结束28h后SAM达到最高积累量后者达到498g/L。两者最终的生物量均可达到130g/L以上。

    • 流式细胞术检测毕赤酵母发酵过程中胞内活性氧水平

      2006, 22(2).

      摘要 (1682) HTML (0) PDF 0.00 Byte (5988) 评论 (0) 收藏

      摘要:以2′,7′-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)和碘化丙锭(PI)为标记探针,通过DCFH_DA/PI双染色与PI单染色的对照,检测毕赤酵母胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平及其影响。研究发现发酵过程细胞活性下降与胞内ROS积累相关。在甘油生长期,细胞几乎没有ROS积累,细胞活性接近100%。在甲醇诱导初期,部分细胞积累少量的ROS,细胞活性仍然很高,死亡细胞所占比例只有1.5%。在甲醇诱导后期,94.0%的细胞积累了大量的ROS,高含量的ROS造成细胞损伤,引起部分细胞丧失了活性,在总共29.1%的死亡细胞中,高ROS积累的死亡细胞占了25.4%。

    • 一种新型的琼脂糖疏水层析介质开发及其在重组乙肝表面抗原(CHOHBsAg)分离纯化中的应用

      2006, 22(2).

      摘要 (1648) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3285) 评论 (0) 收藏

      摘要:以粒径均一的国产高交联度快速流琼脂糖为基质,采用活化、交联等步骤合成了针对分离纯化CHOHBsAg的3C间臂的丁基琼脂糖疏水介质,通过控制丁基配基密度提高分离HBsAg的纯化倍数和回收率,获得了纯化倍数约20、HBsAg回收率约80%的介质。评估了合成介质的理化性质,流速为500cm/h时柱压力小于0.06MPa,表明介质具有较高的机械强度和良好的流动性能,介质经过酸、碱、变性剂等处理后化学性质稳定。将介质合成工艺进一步放大到2L介质/批,应用到HBsAg分离纯化的三步层析整和工艺中,结果表明,批量合成的疏水介质,HBsAg回收率与进口介质相当, HBsAg终产品纯度在95%以上,符合国家药典要求。最后考察了介质合成批次间的配基密度的可控性和单批次合成介质的重复使用性,结果表明,合成工艺和介质的重复性能满足产业化要求,这种成本低的介质有望替代目前工业生产广泛使用的进口疏水介质。

    • 重组HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白制备及其促癌细胞凋亡活性研究

      2006, 22(2).

      摘要 (1568) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2498) 评论 (0) 收藏

      摘要:从人乳腺癌细胞系B-Cap-37中克隆出Survivin 的cDNA,并对其中编码34位Thr的密码子定点突变为Ala的密码子后,经一系列基因操作方法将天然HIVTAT转导肽的突变体基因HIVTATm引入Survivin (T34A)基因的5′端,正确构建了表达载体pRSET-B-HIV-TATm-Survivin (T34A),经转化E. coli BL21 (DE3)后诱导表达,目的蛋白质以包涵体形式表达,占菌体总蛋白的45%。经3.7L发酵罐分批发酵可收获650mg/L的包涵体,经阳离子交换、凝胶层析分离和柱上复性与透析,得到纯度达96%以上的可溶性目的蛋白HIV-TATmSurvivin (T34A)。目的蛋白对人乳腺癌细胞B-Cap37、人胰腺癌细胞SW1990和人肝癌细胞SSMC-7721作用4h后有在细胞形态上呈现出显著的凋亡特征,而对人宫颈癌细胞系Hela不敏感, 对正常的人内皮细胞系EVC304未见明显影响。作用24h时MTT法检测显示,120μg/mL目的蛋白对SW1990、BCap37、SSMC7721和Hela细胞的抑制率分别达到89%、63%、59.5%和39%,且具有剂量依赖性。对最为敏感的SW1990和BCap37以每孔60μg/mL终浓度的目的蛋白作用48h的流式细胞技术检测发现,凋亡率分别为25.6%和19.3%,与对照相比,实验组细胞出现明显的凋亡峰,细胞周期的分布发生明显的变化,65%以上的癌细胞被阻滞于G1期。体外实验结果显示重组目的蛋白具有较强的抑制癌细胞增殖和促进凋亡作用,预示着良好的抗癌前景。

    • 基于二肽组成识别嗜热和常温蛋白的研究

      2006, 22(2).

      摘要 (1571) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1244) 评论 (0) 收藏

      摘要:通过分析3216条嗜热蛋白和4007条常温蛋白的二肽组成,结果发现,在嗜热蛋白中存在更多EE,EK,KE,VE,EI,KI,EV,KK,VK和IE等二肽,更少AA,LL,LA,AL,QA,QL,AQ,LT,TL和EQ等二肽。在此基础上发展了一种识别嗜热和常温蛋白的统计学方法,通过对两组共853个蛋白序列进行识别,该方法识别平均正确率分别可达89.0%和89.6%。同时探讨了一些特定二肽对识别效果的影响。

    • 前体饲喂、诱导子和光照联合使用对葡萄细胞培养合成花青素的影响

      2006, 22(2).

      摘要 (1266) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1372) 评论 (0) 收藏

      摘要:苯丙氨酸前体饲喂分别和环糊精、葡聚糖、茉莉酸甲酯、黑曲霉和直喙镰孢菌提取液五种诱导子联合作用,其中以与茉莉酸甲酯的联合作用对葡萄细胞培养生产花青素的影响最大,可使单位鲜细胞花青素含量提高2.7倍,花青素产量提高3.4倍,实验证明两者在培养后第4天加入效果最好。在30μmol/L苯丙氨酸、218μmol/L茉莉酸甲酯和3000~4000lx光照条件下,不同花青素产量的细胞株都能显著提高花青素产量,但低产株VV06比高产株VV05具有更大的产率提高潜力。该条件下VV05和VV06花青素产量分别达到2975和4090 CV/L,是对照组的2.5倍和5.2倍。

    • 共培养体系在牛核移植胚体外发育培养中的应用

      2006, 22(2).

      摘要 (1540) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1347) 评论 (0) 收藏

      摘要:采用电融合法构建牛体细胞核移植重构胚,分析共培养细胞类型、传代次数、细胞冻融以及蛋白质添加物(BFF和FBS)对牛体细胞核移植胚体外发育的影响,探讨胚胎体外共培养的条件,以建立优化的共培养体系。结果表明:与非共培养组相比,共培养组重构胚的囊胚发育率以及胚胎细胞数显著增加(P<0.05),而输卵管上皮细胞共培养组同颗粒细胞共培养组相比胚胎细胞数显著增加(P<0.05),更适合做共培养细胞;随着共培养细胞传代次数的增加重构胚囊胚发育率及胚胎细胞数显著下降(P<0.05),共培养细胞在冷冻处理后重构胚的囊胚率和胚胎细胞数都显著下降(P<0.05);BFF较FBS更能促进牛核移植胚的囊胚发育率 (P<0.05)。表明应用新鲜原代输卵管上皮细胞进行牛核移植胚胎的共培养,并在SOFaa添加10%BFF能够有效促进核移植胚胎的体外发育。

    • 诱导相温度对毕赤酵母表达重组人复合α干扰素聚合的影响

      2006, 22(2).

      摘要 (1356) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1452) 评论 (0) 收藏

      摘要:研究了Pichia pastoris表达重组人复合α干扰素(Cifn)时诱导期温度对Cifn形成聚合体的影响。在5L罐上考察毕赤酵母在不同温度(30、25、20℃)下诱导时菌体生长和Cifn表达的差异,发现毕赤酵母在20℃下菌体生长不受影响,总蛋白表达量有所降低,相当于30℃发酵时胞外总蛋白的678%。但是通过非还原性电泳、NativePAGE及Western blotting分析发现较高温度(30℃)诱导表达时,分泌到胞外的Cifn容易形成聚合体,单体含量很少。诱导相控制温度为20℃时,明显降低了Cifn聚合体的形成,Cifn单体量为570mg/L,发酵上清液抗病毒活性为1.05×109IU/Ml。与控制诱导相温度为30℃相比,Cifn单体量提高了7.2倍,发酵上清液中单位体积的Cifn抗病毒活性提高了38.7倍。

    • 温度对丙酮酸生物合成动力学、能荷和氧化还原度的影响

      2006, 22(2).

      摘要 (1347) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1879) 评论 (0) 收藏

      摘要:在光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata 620)生产丙酮酸的过程中,温度对丙酮酸生物合成有着重要的影响。考察了不同发酵温度下基质消耗、细胞生长、丙酮酸合成及能荷水平和氧化还原度等方面的差异。在恒温发酵中,维持较高的发酵温度可以增强糖耗,促进菌体生长,加速丙酮酸积累,但前期胞内能荷水平较高,菌体消耗较多葡萄糖合成菌体,后续产酸能力不足,导致丙酮酸得率降低;维持较低的发酵温度可以在发酵后期提供稳定的产酸能力,但菌体代谢缓慢,后期胞内NADH/NAD+水平较高,丙酮酸生产强度降低。因此仅仅采取单一的温度控制策略很难达到丙酮酸高产量、高产率和高生产强度的统一。

    • 重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体发酵的补料-分批策略研究

      2006, 22(2).

      摘要 (1472) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1452) 评论 (0) 收藏

      摘要:人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)是一类对来源于中胚层和神经外胚层的多种类型的细胞具有广泛生物学活性的细胞生长因子。研究了乙酸浓度对重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)改构体表达体系Escherichia coli BL21(DE3)/pET3ChaFGF的生长和表达的影响,探索了几种高密度培养重组大肠杆菌的流加分批发酵技术。通过比较几种不同的补料策略:间歇流加、间歇静态DO平衡、静态溶氧平衡葡萄糖饥饿法、静态pH,有效的避免了发酵过程中,尤其是诱导表达阶段乙酸的积累。菌体密度OD600nm=22左右,可溶性重组人酸性成纤维细胞生长因子纯化后水平为450mg/L。

    • 枯草芽孢杆菌fmbJ产生的新型抗微生物物质体外抗NDV和IBDV的活性分析

      2006, 22(2).

      摘要 (1171) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1511) 评论 (0) 收藏

      摘要:测定了枯草芽孢杆菌fmbJ株产生的新型抗微生物物质的体外抗新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)lasota 株、传染性法式囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)哈尔滨(H)株作用。结果表明该新型抗微生物物质对鸡胚成纤维(Chicken Embryo Fibroblasts, CEF)细胞的TD50和TD\-0分别为128.95mg/L、25.79mg/L;对NDV lasota株、IBDV H株所致细胞病变效应有明显的抑制作用,可使细胞存活率显著升高;该抗微生物物质具有抗NDV lasota 株、IBDV H株作用;并具有预防其感染及抑制其复制的作用。其抗病毒作用效果和病毒唑相当,由于其对CEF细胞的毒性较弱,可作为一种抗病毒药物进行开发研究。

    • DNA溶液的导电行为

      2006, 22(2).

      摘要 (1402) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1267) 评论 (0) 收藏

      摘要:将链长不同的两种DNA溶解在超纯水中,分别测定它们在不同浓度不同温度下的电导行为。试验证明, 同种DNA的电导率随着溶液中DNA的浓度增大而显著增大。而对于两种不同的DNA,短链DNA(<50bp)的电导能力较长链DNA(>1000bp)好。在本文测试的浓度范围内,短链DNA水溶液常温下电导率达到099×10-4S/cm。而且,电导率随DNA浓度的变化规律与指数方程(δ/δ0=aCm)符合得很好。当温度升高时长链和短链DNA溶液的电导率都有明显增大,并且随温度的变化趋势基本一致。

    • 遗传检测综述

      2006, 22(2).

      摘要 (1200) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1727) 评论 (0) 收藏

      摘要:目前,遗传检测正在更多的国家、更广泛的范围内被采用。然而,在中国人们还不大熟悉遗传检测的原理、类型、技术、对社会的益处以及国内或国际是如何对它进行管理的。随着遗传检测的广泛使用,正确的监督显得相当必要。对近年来遗传检测所取得的进展进行了粗略的回顾,这将帮助我们对人类遗传学和分子医学革命的新时代有更多的了解。

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