摘要:生产环糊精所必需的环糊精糖基转移酶与其产物专一性进化研究已经成为当今的研究热点。这项研究中的进展不仅会使环糊精糖基转移酶的应用取得突破结果，还会对其它酶的改造提供帮助。目前，人们对这类酶的性质已经有了较为深入的认识，但还存在着一些尚未解决的问题，如酶产物专一性的决定因素尚未系统阐明等。通过对环糊精糖基转移酶各个方面，尤其是其产物专一性进化方面研究的回顾，指出并分析了研究中尚未解决的问题，并对将来这一研究领域的前景进行了展望。

摘要:胶原蛋白在人体组织中的含量十分丰富，它是具有绕轴周期性螺旋（即三重螺旋）结构的纤维状蛋白，它为细胞粘附和大分子的沉积等提供支架结构。随着基因工程技术和生物材料科学的不断发展，以及对如何获得具有特殊功能胶原蛋白研究的不断深入，使其成为第三代生物材料中倍受瞩目的成员之一。基于胶原蛋白结构的分子设计以及合成途径值得探讨。

摘要:脂肪组织中含有一类具有多向分化潜力的细胞，即脂肪源性干细胞，简称脂肪干细胞。其生物学性质与骨髓间充质干细胞相类似，并可向脂肪、骨、软骨、肌肉、内皮、造血、肝、胰岛和神经等多种细胞方向分化。由于脂肪组织在人体内储量丰富，获取简便创伤小，在组织工程、器官修复、基因治疗等方面都有着广阔的应用前景，因此脂肪干细胞已成为继骨髓间充质干细胞后干细胞领域另一个备受关注的热点。通过以分析脂肪干细胞的多向分化潜力，综述了这一领域最新的研究进展，并就其应用前景及目前研究中一些争议问题进行了探讨

摘要:微生物发酵生产1,3-丙二醇因对环境友好而成为研究热点。通过对发酵菌种、代谢途径、调节子和关键酶的分析，阐述了微生物转化甘油为1,3-丙二醇的分子机理。尤其对还原途径的限速酶-甘油脱水酶的分子结构及再激活因子进行了详细分析，为菌种的遗传改造提供了理论依据。

摘要:尿卟啉原Ⅲ甲基化酶是一种新型的红色荧光指示蛋白，但是，在大肠杆菌重组表达的SUMT水溶性相对较低，限制了它的应用范围，而且对于结合在蛋白的色素组分尚不清楚。利用定点突变产生玉米尿卟啉原Ⅲ甲基化酶L88R/L89G双突变体和L166A突变体，两种突变体分别在大肠杆菌中重组表达，Ni-NTA一步纯化。紫外可见光谱扫描和质谱分析确定从纯化的L88R/L89G双突变体蛋白分离的色素组分。L88R/L89G双突变体在大肠杆菌细胞内有酶活，而L166A突变体胞内酶活丧失。结合蛋白的主要组分为三甲基化咕啉。纯化的双突变体蛋白水溶性增加，为提高它作为荧光指示蛋白检测外源融合蛋白的水溶性打下基础。

摘要:出血性大肠杆菌O157感染是重要的新发食物源性传染病，主要致病特征之一是能引起人肠上皮细胞特征性的A/E损伤，A/E损伤主要是由LEE致病岛所编码的毒力因子所引起，ler是LEE致病岛毒力基因群的中心调节基因，对LEE致病岛所编码的毒力因子有正调控作用。O157:H7另一个毒力因子是由整合到染色体上的原噬菌体编码的Stx毒素。以O157:H7 86-24为始发菌株，利用自杀性质粒pCVD442和同源重组的原理构建了O157:H7的ler基因缺失突变菌株（缺失了ler基因中第73-351位的碱基，共279bp），并利用噬菌体消除技术筛选到消除了编码Stx的原噬菌体DNA的菌株，构建出了O157:H7 ler/stx基因缺失突变弱毒菌株，并对该菌株的Vero细胞毒性、小鼠模型的安全性以及乳鼠的被动免疫保护作用进行了研究。结果表明，O157:H7 ler/stx基因缺失突变菌株丧失了对Vero细胞的毒性作用，并丧失了对实验小鼠的致病性，具有良好的安全性。乳鼠被动免疫保护性实验表明，用该菌株免疫母鼠后，乳鼠通过吸吮母乳可以获得良好的被动免疫保护作用。因此本研究所构建的O157:H7 ler/stx基因缺失突变弱毒菌株可作为预防EHEC O157:H7感染的疫苗候选株，为最终研究制出O157的基因工程菌苗奠定基础。

摘要:制备凝血靶向通用效应因子tTF/SA融合蛋白，并鉴定其生物学活性。利用PCR技术构建tTF与链霉亲和素SA的融合基因，克隆至表达载体pET22 b（+），在E.coli BL21（DE₃）中表达，镍亲和层析柱纯化tTF/SA融合蛋白。凝血实验和FⅩ活化实验鉴定融合蛋白中tTF的活性，ELISA鉴定融合蛋白中SA与生物素Biotin结合的活性。获得序列正确的tTF/SA/pET22 b（+）重组子，融合基因在E.coli BL21（DE₃）中高效表达。纯化后的融合蛋白具有活化FⅩ、引起血液凝固的能力，且能与生物素结合。融合基因已成功在E.coli BL21（DE₃）中表达， tTF/SA融合蛋白具有TF和SA活性。融合蛋白tTF/SA可作为通用效应因子，与生物素化的肿瘤组织血管特异性载体联用，实现选择性诱发肿瘤组织血管栓塞的多点治疗

摘要:为获得整合有人血清白蛋白 (HSA) 基因的猪胎儿成纤维细胞克隆，从猪基因组文库中杂交筛选得到猪血清白蛋白 (PSA) 基因全序列35 kb并克隆了人血清白蛋白cDNA序列，扩增猪血清白蛋白基因5^′调控序列7.2kb片段及第一内含子至第四内含子2.8kb的片段；构建了含有neo及tk正负筛选标记基因的人血清白蛋白基因打靶载体，并验证了neo基因的有效性。将线性化的打靶载体通过电击转染的方法整合到猪胎儿成纤维细胞基因组中，利用G418及GANC进行细胞克隆的抗药性筛选，PCR及Southern blot鉴定抗药性细胞克隆，最终获得3个发生同源重组的细胞克隆。这为下一步进行体细胞核移植制备生产人血清白蛋白转基因猪奠定了基础

摘要:对新型阳离子聚合物PEI(10kD)-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI(10kD)-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性。使用MTT比色法分析PEI(10kD)-PBLG、PEI(25kD)-PBLG、PEI(10kD)和PEI(25kD)的细胞毒性差异。选用表达增强型绿色荧光蛋白的质粒pEGFP作为报告基因模型，将其与PEI(10kD)-PBLG自组装后，分别转染真核细胞株Hela、COS-7、Vero-E6和ECV304，应用流式细胞术检测细胞转染效率，并比较了血清、缓冲液、细胞谱等多种因素对基因转染效率的影响。PEI(10kD)-PBLG可包裹质粒形成粒径100～120nm的纳米复合物，适合介导质粒进入细胞。该纳米粒复合物对转染缓冲液的敏感度较低，并能够在10%血清存在的条件下，转染全部实验用细胞株，尤其对Hela的转染效率最高，其次是COS-7、Vero-E6和ECV304；其中PEI-PBLG(10kD)/pEGFP复合物转染Hela细胞的比率为45.02%，高于PEI(10kD)/pEGFP的29.16%；PEI(10kD)-PBLG的细胞毒性作用显著低于PEI(25kD)、PEI(10kD)和PEI(25kD)-PBLG。新型阳离子多聚物PEI(10kD)-PBLG在提高PEI介导的基因转染效率的同时降低了其细胞毒性，提高了生物相容性，有望成为基因转移的有效载体。

摘要:对新型阳离子聚合物PEI(10kD)-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI(10kD)-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性。使用MTT比色法分析PEI(10kD)-PBLG、PEI(25kD)-PBLG、PEI(10kD)和PEI(25kD)的细胞毒性差异。选用表达增强型绿色荧光蛋白的质粒pEGFP作为报告基因模型，将其与PEI(10kD)-PBLG自组装后，分别转染真核细胞株Hela、COS-7、Vero-E6和ECV304，应用流式细胞术检测细胞转染效率，并比较了血清、缓冲液、细胞谱等多种因素对基因转染效率的影响。PEI(10kD)-PBLG可包裹质粒形成粒径100～120nm的纳米复合物，适合介导质粒进入细胞。该纳米粒复合物对转染缓冲液的敏感度较低，并能够在10%血清存在的条件下，转染全部实验用细胞株，尤其对Hela的转染效率最高，其次是COS-7、Vero-E6和ECV304；其中PEI-PBLG(10kD)/pEGFP复合物转染Hela细胞的比率为45.02%，高于PEI(10kD)/pEGFP的29.16%；PEI(10kD)-PBLG的细胞毒性作用显著低于PEI(25kD)、PEI(10kD)和PEI(25kD)-PBLG。新型阳离子多聚物PEI(10kD)-PBLG在提高PEI介导的基因转染效率的同时降低了其细胞毒性，提高了生物相容性，有望成为基因转移的有效载体。

摘要:对新型阳离子聚合物PEI(10kD)-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI(10kD)-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性。使用MTT比色法分析PEI(10kD)-PBLG、PEI(25kD)-PBLG、PEI(10kD)和PEI(25kD)的细胞毒性差异。选用表达增强型绿色荧光蛋白的质粒pEGFP作为报告基因模型，将其与PEI(10kD)-PBLG自组装后，分别转染真核细胞株Hela、COS-7、Vero-E6和ECV304，应用流式细胞术检测细胞转染效率，并比较了血清、缓冲液、细胞谱等多种因素对基因转染效率的影响。PEI(10kD)-PBLG可包裹质粒形成粒径100～120nm的纳米复合物，适合介导质粒进入细胞。该纳米粒复合物对转染缓冲液的敏感度较低，并能够在10%血清存在的条件下，转染全部实验用细胞株，尤其对Hela的转染效率最高，其次是COS-7、Vero-E6和ECV304；其中PEI-PBLG(10kD)/pEGFP复合物转染Hela细胞的比率为45.02%，高于PEI(10kD)/pEGFP的29.16%；PEI(10kD)-PBLG的细胞毒性作用显著低于PEI(25kD)、PEI(10kD)和PEI(25kD)-PBLG。新型阳离子多聚物PEI(10kD)-PBLG在提高PEI介导的基因转染效率的同时降低了其细胞毒性，提高了生物相容性，有望成为基因转移的有效载体。

摘要:对新型阳离子聚合物PEI(10kD)-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI(10kD)-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性。使用MTT比色法分析PEI(10kD)-PBLG、PEI(25kD)-PBLG、PEI(10kD)和PEI(25kD)的细胞毒性差异。选用表达增强型绿色荧光蛋白的质粒pEGFP作为报告基因模型，将其与PEI(10kD)-PBLG自组装后，分别转染真核细胞株Hela、COS-7、Vero-E6和ECV304，应用流式细胞术检测细胞转染效率，并比较了血清、缓冲液、细胞谱等多种因素对基因转染效率的影响。PEI(10kD)-PBLG可包裹质粒形成粒径100～120nm的纳米复合物，适合介导质粒进入细胞。该纳米粒复合物对转染缓冲液的敏感度较低，并能够在10%血清存在的条件下，转染全部实验用细胞株，尤其对Hela的转染效率最高，其次是COS-7、Vero-E6和ECV304；其中PEI-PBLG(10kD)/pEGFP复合物转染Hela细胞的比率为45.02%，高于PEI(10kD)/pEGFP的29.16%；PEI(10kD)-PBLG的细胞毒性作用显著低于PEI(25kD)、PEI(10kD)和PEI(25kD)-PBLG。新型阳离子多聚物PEI(10kD)-PBLG在提高PEI介导的基因转染效率的同时降低了其细胞毒性，提高了生物相容性，有望成为基因转移的有效载体。

摘要:骨髓间质干细胞（MSCs）是目前基因工程正在探讨应用的靶细胞，为构建带有脑源性神经营养因子（Bdnf）基因慢病毒载体并使其在大鼠骨髓间质干细胞中表达，采用RT-PCR技术获得大鼠Bdnf基因编码区（CDS）片段，限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒PNL-BDNF-IRES₂-EGFP，在脂质体介导下与包装质粒HELPER，包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产慢病毒。所获慢病毒感染大鼠MSCs（rMSCs）后，PCR和免疫细胞化学法检测在rMSCs中Bdnf基因的插入和表达。结果显示所获的Bdnf基因经测序后与GenBank报道序列完全一致。重组慢病毒载体质粒PNL-BDNF-IRES2-EGFP经鉴定正确。三质粒共转染293T细胞成功，收集、浓缩病毒后测定其滴度为6.7×10⁷TU/mL， PCR证实Bdnf基因插入病毒基因组。感染rMSCs后RT-PCR、免疫细胞化学染色及Western检测各组细胞均有BDNF蛋白表达，其中试验组BDNF-rMSCs更大量表达BDNF，与其余2组(Mock-rMSCs、rMSCs)比较差异具有统计学意义。构建带有Bdnf基因慢病毒载体并在大鼠骨髓间质干细胞中成功表达，为今后基因修饰干细胞的移植后长期观察研究奠定了基础。

摘要:以莱航鸡重复的rDNA 基因间的间隔序列为靶位点，利用BAC重组酶系统构建含人干扰素基因的多位点基因打靶载体，为建立莱航鸡多位点基因打靶技术获得关键材料。首先构建BAC-TDN筛选载体，然后构建pYLVS-GID表达载体。将BAC-TDN筛选载体和pYLVS-GID表达载体共转化至大肠杆菌NS3529中，通过其Cre重组酶的作用形成BAC-TDN-VS-GID质粒，采用归位内切酶I-SceⅠ切除pYLVS质粒骨架，利用接头LS使之环化，构建成莱航鸡大容量多位点基因打靶载体BAC-TDN-GID。每次克隆均经酶切或PCR、测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向。以该载体为材料的多位点基因打靶技术将提高基因定点整合效率，解决外源基因不能稳定表达、安全性等部分问题，突破了DNA重复序列不能作为外源基因整合靶位点的禁区。

摘要:旨在优化胰腺干细胞分离、鉴定的方法和体系，为糖尿病研究和治疗提供种子细胞。采用胶原酶消化法，分离培养出胰岛样细胞团（ICCs），对其进行贴壁培养，从中纯化出上皮样细胞。采用MTT法测定其生长情况并绘制生长曲线。采用免疫组织化学染色检测分离得到细胞的PDX-1、PCNA、CK-7、CK-19、Nestin、Glut2、Vimentin、Insulin表达情况。应用流式细胞仪检测其表面标志。由分离培养的ICCs成功纯化出上皮样细胞；传40代，每代冻存10⁶～10⁸个细胞；生长曲线显示其传代第3天进入对数生长期，第5天进入平台期；免疫组织化学染色显示其表达PDX-1、PCNA、CK-7、CK-19、Nestin、Glut2、Vimentin；不表达Insulin；流式细胞仪分析表明其表达CD29、CD44、CD166，不表达CD11a、 CD14、CD34、CD45、CD90、CD105、CD117。由胎儿胰腺能分离出具有自我更新能力的上皮样细胞，为导管来源，具干细胞特性。

摘要:通过体外诱导人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)向多巴胺(dopamine, DA)神经元分化，探讨人BMSCs来源的DA神经元的功能特征及其分化机制，为临床上细胞移植替代治疗诸如帕金森氏病(parkinson's disease, PD)等神经精神性疾病提供一种理想的细胞来源。通过密度梯度离心获取人骨髓中的单个核细胞，贴壁培养纯化BMSCs。50μmol/L脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophy factor, BDNF)，10μmol/L forskolin(FSK)和10μmol/L DA联合对BMSCs进行诱导。电子显微镜观察诱导2周后细胞是否具有神经元的超微结构特点；免疫细胞化学染色和RT-PCR检测DA神经元分化过程中的标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH）的表达以及转录因子Nurr1、Ptx3和Lmx1b的表达；高效液相色谱（high performance liquid chromatogram, HPLC）检测诱导2周后的细胞多巴胺的释放水平。 结果表明，诱导2周后，电镜下细胞胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体以及神经微丝的形成。RT-PCR结果显示NSE(neuron specific enolase)、Nurr1、Ptx3、Lmx1b和TH的mRNA均有表达；免疫细胞化学染色结果表明诱导2周后TH阳性细胞(24.80±3.36）%的表达较诱导3d后(3.77±1.77)%明显提高(P<0.01）；HPLC检测到诱导2周后的细胞DA释放水平［(1.22±0.36)μg/mL(n＝6)］高于未经诱导的细胞［(0.75±0.22)μg/mL(n＝6) (t＝－2.79，P＝0.038)］。 由此得出，BDNF、FSK和DA可以在体外诱导人BMSCs向DA神经元分化，并具有DA神经元的功能特征，是临床用于治疗神经精神性疾病的理想细胞来源。

摘要:研究了A. heterophyllus, A. squamosa, T. bellirica, S. samarangense, A. carambola and O. europa 水果的抗氧化活性。首先将这些成熟的水果切成小片，然后用日光晒干，最后用研磨器磨成粉末。这些水果粉末用99.99%的乙醇进行乙醇提取。这些提取物的活性通过其清除稳定的1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)自由基的能力进行测定。实验结果表明，所有A. heterophyllus, A. squamosa, T. bellirica, S. samarangense, A. carambola and O. europa这些水果的乙醇提取物都具有抗氧化活性，这些水果的乙醇提取物的的IC₅₀值分别是410, 250, 34, 200, 30 和76μg/mL。其中A. carambola具有最高的抗氧化活性，其次是T. bellirica, O. europa, S. samarangense, A. squamosa 和 A. heterophyllus 。结果表明A. carambola, T. bellirica 和 O. europa对人体健康是非常有益的。

摘要:用原位合成纳米羟基磷灰石的方法制备多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架；在支架上接种MC 3T3-E1细胞，瑞氏染色检测细胞形态，MTT法检测其增殖情况；在诱导培养基中培养30d后，碱性磷酸酶染色比较其分化水平；定量检测细胞的碱性磷酸酶活性；RT-PCR检测成骨相关基因的表达情况。实验结果表明：MC 3T3-E1细胞在纳米级羟基磷灰石/壳聚糖复合支架上粘附铺展良好，其增殖率显著高于培养于纯壳聚糖支架上的细胞。碱性磷酸酶染色表明复合支架上的细胞有较高水平的碱性磷酸酶表达。进一步定量检测细胞的碱性磷酸酶活性，结果说明在复合支架上细胞比纯壳聚糖支架上培养的细胞碱性磷酸酶活性提高了约8倍。此外，骨分化相关特征基因骨桥蛋白OPN在复合支架上培养的细胞中的表达水平也明显高于纯壳聚糖上培养的细胞。分化成熟标志基因骨钙素OC在复合支架上培养的细胞中有表达，但是纯壳聚糖支架上培养的细胞中却未检测到。支架中纳米羟基磷灰石的加入不仅提高了前成骨细胞在复合支架上的增殖，而且还促进了它的分化。纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架表现出良好的生物相容性和生物活性，是极具前景的骨组织工程支架材料。

摘要:由本实验室筛选得到的摩尔摩根氏菌J-8菌株可将底物1-苯基-2-甲氨基丙酮专一性地转化为d-伪麻黄碱。以M. morganii J-8为出发菌株，菌体超声破碎后，经硫酸铵沉淀、Phenyl Superose疏水柱层析、DEAD阴离子柱层析和非变性凝胶电泳四步纯化获得电泳纯羰基不对称还原酶。亚基分子质量为42.5 kD，高效液相色谱分析酶的分子质量约为84.1 kD，初步认为该酶为二聚体蛋白。对所得到的部分纯化酶的酶学性质做了初步研究，纯酶进行基质辅助激光解析电离-飞行质谱分析，比对结果显示为与亮氨酸脱氢酶蛋白有很高相似性。

摘要:Aspergillus fumigatus来源的植酸酶具有热稳定性好、pH作用范围广的优点, 但其比活性很低。设计的植酸酶Q23L突变能在pH4.5～7.0范围内大幅提高比活性，但pH稳定性却显著下降, 为了进一步改良Q23L的pH稳定性, 在Q23L分子上加入了G272E突变。将原酶、突变酶Q23L和突变酶Q23LG272E分别在毕赤酵母GS115中表达，表达酶经纯化后进行酶学性质比较分析,结果表明：突变酶Q23L的比活性比原酶显著提高, 在pH5.5比活性由51u/mg提高到109u/mg, 但其pH稳定性, 尤其是在pH3.0～4.0酸性条件下的稳定性却显著降低，低于80%。突变酶Q23LG272E在pH3.0～4.5和pH6.5～7.0时的稳定性比Q23L有所提高, 恢复到原酶的水平，而比活性基本维持在Q23L的水平。通过一级序列和三维结构比较，分析了可能影响Q23LG272E酶学性质的因素，为进一步研究植酸酶的结构与功能提供了材料。

摘要:为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶，从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC，并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达，发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0，37 ℃下在pH8～10的缓冲液中保温1 h酶活几乎不改变。重组酶反应的最适温度为75 ℃，酶活稳定的温度范围为25～55℃。重组酶在65℃时半衰期为3.5h，75℃时为2.5h。重组酶的K_m^KG为7.559mmol/L，V_max^KG为0.086mmol/(L·min)，K_m^Asp为2.031mmol/L，V_max^Asp为0.024mmol/(L·min)。Ca²⁺、Fe³⁺、Mn²⁺等金属离子对酶活性有微弱抑制作用。

摘要:HLA-A^*2402是中国人群中最常见的等位基因之一，为研究该基因型人群的人巨细胞病毒（HCMV）特异性细胞毒T细胞（CTL）免疫应答，需要制备负载相应抗原肽的HLA-A^*2402四聚体。以RT-PCR方法克隆HLA-A^*2402重链基因的cDNA，并构建了羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A^*2402重链胞外域融合蛋白（HLA-A^*2402-BSP）的表达载体，但该载体不能在大肠杆菌(E. coli)中有效表达HLA-A^*2402-BSP融合蛋白；通过对氨基端（N端）区域编码区的密码子进行优化，构建了同义突变的HLA-A^*2402-BSP表达载体，融合蛋白在E. coli中获得了高效表达。进而制备了负载HLA-A^*2402限制性HCMV pp65_341-349抗原肽(QYDPVAALF, QYD)的可溶性HLA-A^*2402-QYD单体分子和四聚体，获得的四聚体具有与HLA-A24⁺供者抗原特异性CTL的结合活性，特异性CTL的频率为总CD8⁺T细胞的0.09％～0.37％。这些结果为进一步研究HLA-A^*2402限制性的特异性CTL免疫应答规律奠定基础。

摘要:在本实验室研制出的多株针对H5N1血凝素的鼠单抗中，10F7对34株H5N1病毒株都有血凝抑制和中和活性，具有特异性高、反应性强、识别谱广的特点。通过基因工程构建10F7单链抗体（scFv）表达重组质粒，在大肠杆菌中表达并纯化scFv，经血凝抑制实验及中和实验检测其活性。结果在针对3株病毒的血凝抑制实验中，10F7 scFv蛋白对其中2株H5N1病毒均显示出结合活性，而对H9毒株没有反应。在针对7株H5N1病毒的中和实验中，10F7 scFv对5株病毒具有较好的中和能力。H5N1广谱中和抗体10F7的单链抗体构建，为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础。

摘要:亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)是新发现的一株产氢海洋单细胞绿藻，经过胁迫调控可实现一定时间的持续产氢。氢酶是亚心形扁藻在胁迫条件下进行光合产氢的一个关键酶。但到目前为止，亚心形扁藻氢酶相关信息仍不清楚。利用蛋白合成抑制剂氯霉素和放线菌酮对亚心形扁藻氢酶活性进行考察，同时利用免疫印迹技术和免疫胶体金电镜对亚心形扁藻氢酶蛋白进行亚细胞定位分析。结果表明：亚心形扁藻氢酶蛋白可能由胞浆内合成，在叶绿体行使功能。采用免疫共沉淀技术富集亚心形扁藻细胞氢酶蛋白，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）对免疫共沉淀复合物进行分离，从胶中切取目的蛋白条带，胶内酶解后进行基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析，得到相应的肽指纹图谱，通过搜索数据库检索初步断定亚心形扁藻氢酶蛋白为铁氢酶。

摘要:微囊化基因工程细胞移植治疗肿瘤是一种新兴的肿瘤治疗方法，如果将此技术应用到临床研究，就需要制备大量的细胞活性良好、重组蛋白表达量高的生物微胶囊。体外培养和冷冻保存是生物微胶囊制备过程中两个重要的环节，因此需要考察体外培养和冷冻保存对微囊化重组基因细胞生长和蛋白表达的影响。以重组CHO细胞为模型，考察了体外培养时间和冷冻保存对微囊化细胞在动物体内生长和内皮抑素表达的影响及体外培养时间对微囊化细胞冷冻保存的影响。结果表明：体外培养时间对微囊化细胞在动物体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性具有较大的影响，体外不培养和培养4d的微囊化细胞在小鼠腹腔内生长良好、内皮抑素表达量高，并且微囊稳定性好，而体外培养8d的微囊化细胞在移植后的第26天破裂。体外培养时间对微囊化细胞冷冻保存也具有较大的影响，体外培养4d和8d的微囊化细胞在液氮中冷冻保存40d，复苏后细胞生长良好、内皮抑素表达量高，而冻存前未经过体外培养的微囊化细胞，复苏后细胞几乎全部死亡。综上所述，生物微胶囊在体外比较适宜的培养时间为4d。并且冷冻保存对微囊化细胞在动物体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性没有显著的影响。

摘要:戊型肝炎病毒衣壳蛋白内包含一个强H-2^d限制性Th表位P34。以该表位肽免疫BALB/c鼠，其脾细胞能够在体外识别重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白，剔除实验表明应答细胞几乎完全是CD4⁺ T细胞，证明P34表位肽能有效诱导产生特异性Th细胞。以P34肽初免小鼠，再以包含该表位的重组戊型肝炎病毒抗原（E2）免疫，结果表明，10μg、 20μg E2免疫组在免疫后第1周即有部分小鼠产生抗体，到第3周所有小鼠均能够产生抗体；而对照肽P18初免的小鼠，以20μg E2加强免疫亦无法诱导小鼠产生抗体。这表明，Th表位肽P34初免诱导产生的Th细胞能够有效促进小鼠对携带该表位的载体蛋白的体液免疫应答。

摘要:将编码猪细小病毒主要免疫保护性抗原VP2基因插入干酪乳杆菌细胞表面表达载体pPG中，构建了重组表达载体pPG-VP2，将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393，获得了表达猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌系统，经2%乳糖在MRS培养基中的诱导表达，SDS-PAGE检测表明，有约74kD蛋白得到了表达，表达蛋白的大小与理论值相符。Western-blot结果分析表明，表达的蛋白可被鼠源PPV抗血清所识别，间接免疫荧光实验结果表明，所表达的蛋白能够在干酪乳杆菌菌体表面检测到。

摘要:为了获得能够携带较大外源基因的犬2型腺病毒E3区缺失性载体，以犬2型腺病毒全基因组质粒pPolyⅡ-CAV-2及E3区重组质粒pVAX-E3为基础，缺失1381bp的E3区片段(92.6%的E3区全序列)，插入Linker-NF(内含NotⅠ、ClaⅠ、FseⅠ多克隆位点)，获得重组载体质粒pPolyⅡ-CAV-2-ΔE3（NF）(31.9kb)。以AscⅠ和PmeⅠ双酶切，游离重组基因组，在脂质体Lipofectamine^TM 2000介导下，转染MDCK细胞系，获得了E3区缺失的重组病毒CAV-2-ΔE3（NF）。通过病毒的形态学观察，血凝性、生长特性、感染性实验证明，该重组病毒与母源病毒没有差异。重组病毒CAV-2-ΔE3（NF）可以作为载体表达外源基因，其外源基因插入片段不小于3.3kb。

摘要:以聚乙烯醇为固定化载体，固定化冷冻处理过的啤酒酵母细胞从CMP制备CTP；分别从胶的型号、浓度和固定化方法的优化等方面摸索了最适的固定化条件，固定化细胞在试验条件下连续发酵8次，转化率维持在85%～95%。同时，还对固定化细胞的稳定性进行试验研究，并用HPLC对产品进行了分离鉴定。

摘要:研究了在添加外源精胺时，霍山石斛类原球茎细胞生长、多糖积累、主要营养物质消耗以及细胞内多胺含量的变化。结果表明，0.6mmol/L的精胺明显促进霍山石斛类原球茎细胞的生长和多糖的合成。细胞的比生长速率从0.046d^-1提高到0.054d^-1。培养30d时，类原球茎干重达32.4g DW/L，多糖总产量为2.46g/L ，分别是对照的1.32和1.31倍。添加外源精胺能够提高内源多胺的含量，同时，蔗糖酶和硝酸还原酶等相关代谢酶的活性增强，促进了碳、氮的吸收和利用。

摘要:代谢组学是系统生物学的一个重要组成部分，应用相关方法获得了大量的数据。如何处理这些数据以及如何将这些数据与其他组学数据结合起来的问题不容忽视。在酶的反应动力学方程中引入“酶量倍数因子”能够解决其中的部分问题。如果反应动力学方程中酶的量发生变化，只需要改变相应的酶量倍数因子的数值。为了观察酿酒酵母糖酵解途径中酶量变化对乙醇浓度的影响，设定了高低两个酶量水平进行计算机模拟，对应的酶量倍数因子分别为10和0.1。基于计算机模拟结果，使用聚类分析方法，12种酶被分为两类。属于第一大类的四种酶ADH、HK、PFK和PDC，均催化不可逆反应。第二大类8种酶中的6种，ALD、GAPDH、GlcTrans、lpPEP、PGI和TIM均催化可逆反应。第二大类中另外两种酶lpGlyc和PK催化不可逆反应。按照这种方法，代谢组和蛋白质组数据能较容易地结合起来对系统作出较全面的分析。

摘要:在静置液体培养和振荡液体培养方式下，研究了聚乙二醇（PEG）胁迫对金发草［Pogonatherum paniceum（Lam.）Hack］愈伤组织的再生能力和游离脯氨酸（F-Pro）积累的影响。发现金发草愈伤组织具有较高的耐PEG胁迫能力，培养方式与PEG胁迫对其再生抑制上存在时间与程度两个方面的表现。振荡培养方式主要表现为延迟再生时间，而PEG胁迫则主要表现为降低再生频率。两种培养方式都能使愈伤组织在PEG胁迫下发生F-Pro积累，F-Pro含量随PEG浓度的增加和培养时间的增长而升高。去胁迫后，大部分愈伤组织都能够恢复再生能力，F-Pro可能在抑制和恢复过程中作用较复杂。因此，在利用愈伤组织筛选抗旱植株时，PEG浓度应在300 g·L^-1以上，处理时间3周以上，静置培养更有利于抗旱突变体的筛选。

摘要:为建立基于细胞瞬时转染的过氧化物酶体增殖物激活受体δ (peroxisome proliferator-activated receptor delta PPARδ)激动剂高通量筛选模型，用RT-PCR 技术从肝的总RNA中扩增PPARδ基因序列，将其连至T克隆载体进行测序。将序列正确的PPARδ片段连接至pTARGET载体上构建表达载体pTARGET-ppARδ；将合成的3个拷贝的PPRE (peroxisome proliferator receptor response element)插入pGL3-promoter构成报告质粒pGl3-PPRE×3-luc。用脂质体转染技术将表达载体与报告质粒共转染细胞系，通过检测荧光素酶基因的表达状况评价化合物对PPARδ的激动活性。通过多种条件的优化,得到了最佳的共转染条件。阳性药苯扎贝特明显提高荧光素酶的表达,最大上调倍增数可达10倍，并且在一定浓度下阳性药与相对荧光酶的活性表达有较好的量效关系。该筛选模型灵敏、稳定,为对PPARδ激动剂进行药物研发和PPARδ机理的研究打下基础。

摘要:以pUC19、pECBAC1、pCLD04541 DNA以及3个不同大小的BAC DNA为材料，研究了E.coli DH10B菌株在5个不同脉冲电场下的转化效率。研究发现，随着DNA片段大小的增加，最高转化效率和最适场强迅速减小。利用DH10B细胞转化pUC19 DNA的最适场强是21 kV/cm，而190 kb BAC DNA仅为13 kV/cm；在最适场强下，40 kb BAC DNA的转化效率约是190 kb BAC DNA的50倍。通过大量数据绘制了不同因素影响下转化效率的变化曲线，优化了E.coli DH10B菌株电转化条件，为质粒的重组转化以及大片段基因组文库的构建奠定了基础

摘要:次级淋巴组织趋化因子（SLC）是通过搜索表达序列标签（EST）数据库克隆出来的一CC类趋化因子。以人SLC序列为蓝本，利用重叠PCR（SOE-PCR）的方法获得了适宜在大肠杆菌中表达的SLC基因，将此序列分别克隆至表达载体pTMF和pALM中，转化大肠杆菌，诱导表达。Western Blotting鉴定结果表明目的蛋白以可溶蛋白和包涵体两种形式表达，两种形式的蛋白所占比例依培养和诱导条件的不同而变化。对两种形式的表达产物分别用Ni-NTA金属亲和层析和包涵体复性方法纯化，在实验中还对纯化条件进行了探索。对纯化蛋白的电泳结果显示：纯化样品的分子量比预期的分子量要大。

摘要:次级淋巴组织趋化因子（SLC）是通过搜索表达序列标签（EST）数据库克隆出来的一CC类趋化因子。以人SLC序列为蓝本，利用重叠PCR（SOE-PCR）的方法获得了适宜在大肠杆菌中表达的SLC基因，将此序列分别克隆至表达载体pTMF和pALM中，转化大肠杆菌，诱导表达。Western Blotting鉴定结果表明目的蛋白以可溶蛋白和包涵体两种形式表达，两种形式的蛋白所占比例依培养和诱导条件的不同而变化。对两种形式的表达产物分别用Ni-NTA金属亲和层析和包涵体复性方法纯化，在实验中还对纯化条件进行了探索。对纯化蛋白的电泳结果显示：纯化样品的分子量比预期的分子量要大。