摘要:植物根部能够与微生物形成相互依存、互惠互利的共生关系，非豆科植物根系主要与内生真菌形成菌根的共生体。共生受体样蛋白激酶（symbiosis receptor_like kinase，SYMRK）是植物识别菌根真菌诱导而产生的特异分子，它的蛋白结构由三个部分组成，即：包含3个富含亮氨酸重复序列（LRRs）的胞外受体结合域、跨膜区和胞内蛋白激酶域。Symrk是控制共生形成的一个关键组分，该基因所编码的蛋白在植物识别和应答菌根真菌早期信号转导途径中是必需的。对Symrk基因的研究为进一步弄清植物_真菌共生的功能和作用机理打下了坚实的基础。

摘要:结构基因组学和功能基因组学的发展使特定植物基因组和转录组序列的获取更为方便和快捷。随之而来的是对各种基因和调控序列的功能注释，探索植物生长和发育的遗传机理。表达和调控表达是遗传物质的自身语言和动态属性，因此通过植物细胞内表达来分析目标基因和序列的表达和调控行为是功能分析的主要立足点。除创造转基因植株外，近几年来植物细胞瞬间表达系统得到了广泛的使用，与基因重排、病毒诱导基因沉默和RNA干扰等新兴技术的结合使其在植物功能基因组研究中扮演了越来越重要的角色。

摘要:EF手图像超家族蛋白泛指一类含有由螺旋区-泡区-螺旋区构成的EF手图像模体的蛋白。 这类蛋白通常都具有金属离子结合能力或者形成二聚体的能力。 肌钙蛋白C是一种EF手图像蛋白，它具有钙离子结合能力，可以与肌钙蛋白I、肌钙蛋白T形成复合物调节肌肉收缩。 目前，国内外对肌钙蛋白C的研究多数集中在脊椎动物上，而对无脊椎动物的研究较少。主要从EF手图像超家族的特性及其家族成员——肌钙蛋白C的分类、结构及功能等方面进行了阐述，并结合笔者自身的研究方向，简要介绍了家蚕肌钙蛋白C的研究情况及前景。

摘要:根据已知hepcidin氨基酸序列，参照毕赤氏巴斯德酵母( Pichia pastoris) 密码子偏好性，设计合成了hepcidin目的基因。所合成的hepcidin基因全长96bp，其5′ 端引入KEX2基因产物（Kex2）的特异性识别位点序列，以保证表达产物具有天然N端。通过基因重组的方法将hepcidin基因克隆到pPicZαA 载体中，构建了分泌型重组酵母表达载体pPICZαA_Hepc，经电转至毕赤酵母GS115中表达。使用浓度高达1500 μg/mL的Zeocin 筛选得到高拷贝插入GS115菌株，经摇瓶发酵和甲醇诱导，上清液有明显的hepcidin表达，表达量达到100 mg/L。初步抗菌特性研究表明,该表达产物对枯草芽孢杆菌有明显的抑菌作用，而对大肠杆菌抑菌效果不明显。

摘要:由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路，是细胞发育和生长调节的一个关键途径，对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中，Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子，在胚胎发育中起着关键作用。利用RACE技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个Wnt家族基因，序列分析表明该基因的完整编码框含1311bp，编码436个氨基酸，理论分子量49.6kD。同源性分析结果表明，该基因的氨基酸序列具有典型Wnt家族蛋白特征，与日本三角涡虫、人Wnt4的氨基酸序列相似性分别达43％、37％，推测为血吸虫的Wnt4基因，命名为Sjwnt4（GenBank登陆号DQ643829）。实时定量PCR分析显示该基因在14d童虫、19d童虫、31d虫体、44d雌虫及44d雄虫中均有表达，其中19d童虫中的表达量明显高于其它发育阶段，44d雌虫中的表达量明显高于雄虫。构建了该基因的原核表达载体pGEX_4T_2_Sjwnt4，应用大肠杆菌系统进行了表达，表达蛋白以包涵体形式存在，Western印迹显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。Sjwnt4基因及其表达产物的获得，为探索Wnt信号通路对血吸虫发育、生殖的调节提供了重要基础。

摘要:克隆胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）的cDNA片段，构建原核表达载体pET-DsBA-IGFBP3。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3)plysS中，诱导表达IGFBP-3融合蛋白（简称D-IGFBP3）。经检测融合蛋白主要以可溶形式表达。表达产物用His亲和层析柱纯化，获得了纯度超过95%的重组IGFBP-3融合蛋白。Western-blot 结果表明在相应分子量处有一条特异性条带。细胞活性研究显示它对MCF-7细胞生长具有一定的抑制作用，且在体外具有与IGF-I结合的活性。

摘要:从噬菌体随机展示十五肽文库筛选出4个与轮状病毒粒子特异性结合多肽。经空斑减少抑制实验和MTT法分析表明其中3个多肽对病毒感染培养细胞具有抑制作用，其中序列为QSNPIHIITNTRNHP的C肽具有显著抑制作用，抑制效果达93%，另外2个多肽A和B抑制效果分别为40%与50%。经过多肽序列分析发现这3个十五肽具有2个保守序列，分别是第2至8个氨基酸残基SNPIHII和第12～15个氨基酸残基NIP。胰蛋白酶水解位点分析表明C肽无裂解位点，而A肽和B肽则分别具有3个和4个潜在水解位点。抑制病毒感染液中胰蛋白酶活性，发现A，B两肽也能显著地抑制病毒离体感染。说明所筛选的多肽2个保守序列的完整对抗病毒感染起着重要作用。C肽有望成为一种治疗轮状病毒感染的口服药物。

摘要:为了发展一种新型的融合蛋白(RGD)3/tTF用于肿瘤血管的选择性栓塞治疗，利用PCR技术重组(RGD)3/tTF融合基因，克隆于pET22 b（+）载体，表达于E.coli BL21(DE₃）。用镍柱纯化融合蛋白。凝血实验与FⅩ活化实验检测融合蛋白tTF组分的活性。间接ELISA分析(RGD)3/tTF与 α_ｖβ₃的特异结合能力。pET22 b（+）/(RGD)3/tTF重组质粒成功获得并表达于E. coli BL21（DE₃）。纯化蛋白(RGD)3/tTF能有效诱发血液凝固，活化FⅩ。(RGD)3/tTF与α_ｖβ₃的特异结合能力比RGD/tTF提高了32%。 新型融合蛋白(RGD)3/tTF已在E. coli系统成功表达，表达蛋白保持tTF的活性并显示比RGD/tTF更高的与α_ｖβ₃的结合能力。

摘要:BMP6属于TGF-β超家族，具有较强的骨诱导作用。主要利用BMP6自身的信号肽、前肽与成熟肽基因序列构建了表达质粒pcDNA-BMP6；同时利用BMP2的信号肽、前肽与BMP6的成熟肽基因序列构建了表达质粒pcDNA-BMP2/6。将两种质粒分别瞬时转染Cos7细胞，发现质粒pcDNA-BMP2/6表达rhBMP6的效率高于质粒pcDNA-BMP6。然后将质粒pcDNA-BMP2/6与含二氢叶酸还原酶基因(dhfr)的表达质粒共转染dhfr缺陷型的中华仓鼠卵巢（CHO）细胞，经G418筛选、氨甲蝶呤（MTX）介导目的基因扩增、亚克隆后得到表达rhBMP6成熟肽的单克隆细胞株。将表达产物rhBMP6初步纯化后，能诱导前成肌细胞系C2C12向成骨细胞方向转化，显示其具有骨诱导作用。

摘要:为了获得抗菌活性较强的抗菌肽，将几种抗菌肽串联起来在毕赤酵母中表达，并比较其与单独抗菌肽的抑菌活性。以GenBank中的Protegrin_1(PG-1)、Scorpion Defensin(SD)、Metalnikowin_2A和Sheep Myeloid Antibacterial Peptide(SMAP_29) (序列号分别为AAB27599，AAAB27538、P80409和P49928)成熟肽段作为模板序列，根据巴斯德毕赤氏酵母(P.pastoris)偏好密码子，设计并人工合成复合抗菌肽pl基因，同时用SOE法获得Scorpion Defensin的基因，分别克隆到pPICZαA载体中，转化P.pastoris受体菌X-33，在醇氧化酶(AOX)启动子调控下，复合抗菌肽PL及SD均获得表达。体外抑菌试验检测复合抗菌肽PL与单独的蝎子防御素SD的热稳定性、酸稳定性、最低抑菌浓度等，结果显示复合抗菌肽PL及SD具有很强的热酸稳定性，而针对不同的细菌，复合抗菌肽则表现出了强于单独的SD的活性，特别是对大肠杆菌。上述结果说明了该复合抗菌肽具有很好的开发前景。

摘要:为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制，通常需要构建多个真核表达载体，涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此，利用pIRES载体为骨架质粒，在A和B多克隆位点上分别插入c-Myc标签蛋白序列和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）序列，从而构建了一个包含c-Myc标签蛋白序列并携带有核糖体结合位点(IRES)介导的增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体：pCMV-Myc-IRES-EGFP。通过荧光检测和免疫印迹实验证实该载体能在哺乳细胞中表达。该载体可用于监测细胞的转染效率、分选稳定表达的阳性细胞群体、体外转录和翻译、检测或纯化目的蛋白以及捕获相关作用蛋白等多种实验研究，为基因功能研究提供了便利。

摘要:根据GenBank中番茄的番茄红素β-环化酶（Lcy）基因序列和八氢番茄红素去饱和酶基因（Pds）启动子序列设计特异引物从番茄基因组DNA中分别扩增出了Lcy基因的高度保守的长302bp的DNA片段和长1790的Pds启动子片段。根据RNAi的原理，将Lcy基因的DNA片段以正反两个方向通过一段内含子序列连接在一起形成RNAi片段，将该片段与Pds启动子一起插入到pVCT2020的表达载体中，通过农杆菌介导的方法转化番茄，获得转基因植株5棵，PCR检测证实外源片段已成功导入番茄基因组中。收获转色期后20d左右的完全成熟的番茄果实提取番茄红素进行含量分析，结果显示：转基因番茄果实中番茄红素的含量极大的增加了。上述结果表明：通过RNAi果实特异性的抑制类胡萝卜素代谢途径中生物合成酶基因的表达能够极大的增加番茄果实中番茄红素的含量。这为通过基因工程手段提高番茄果实中的营养价值提供了参考

摘要:此前已构建了基于Semliki Forest病毒（Semliki Forest virus，SFV）复制子载体的表达猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）E2基因的新型猪瘟DNA疫苗pFV1CS-E2，通过动物试验证实，该疫苗以600μg/头的剂量免疫3次，免疫猪能抵抗致死剂量猪瘟强毒的攻击。为进一步评价该疫苗在较低的免疫剂量和较少的免疫次数情况下的免疫效力，将DNA疫苗pSFV1CS-E2和空载体pSFV1CS按100μg/头的剂量，接种猪只2次，然后用致死剂量的猪瘟强毒石门株进行攻击。结果表明，pSFV1CS-E2免疫组（n=5）所有免疫猪在加强免疫后均产生了猪瘟特异性中和抗体，攻毒后所有猪只抗体迅速升高，除了短期体温升高外，未出现任何其它临床症状，部分猪出现短期轻微病毒血症，个别猪的部分脏器出现轻微病变；而空载体免疫组（n=3）猪只在攻毒前一直没有检出特异性抗体，攻毒后全都出现典型的猪瘟临床症状和严重的病毒血症，有2头猪分别于攻毒后第10和11d死亡，剖检时可见典型猪瘟病理变化。结果表明，基于甲病毒复制子载体的猪瘟DNA疫苗有望成为具有开发价值的猪瘟标记疫苗。

摘要:根据GenBank中人源大肠杆菌pilA基因序列，用OLIGO6.0设计PCR引物，从鸭源致病性大肠杆菌GH1.2中扩增到pilA基因并将其克隆至pMD18-T载体，经PCR、酶切和DNA测序鉴定后，将鸭源致病性大肠杆菌pilA基因正向插入原核表达载体pET-32a（+）的BamHⅠ和HindⅢ位点间，成功构建了重组表达质粒pET-32a-pilA。重组表达质粒pET-32a-pilA转化表达宿主菌BL21（DE3），用IPTG诱导，表达出了大小约为36kD的pilA重组蛋白。表达产物用镍柱亲和层析纯化，与等量弗氏佐剂混合制备pilA重组蛋白疫苗，分别在1日龄、8日龄时两次对雏鸭进行免疫，二免后2周测定鸭血清中的ELISA抗体效价，并以10⁹PFU同源菌株GH1.2攻毒，根据攻毒后鸭的死亡率、E.coli分离率和各组织器官的病变等级来判定pilA重组蛋白的免疫保护效果。结果pilA重组蛋白免疫鸭的血清中ELISA抗体效价为1∶12800，全菌灭活苗免疫组的血清ELISA抗体效价为1∶200；同源菌株攻毒后，pilA重组蛋白免疫保护组鸭的死亡率、E.coli分离率和各组织器官的病变程度均比攻毒对照组下降且差异显著或极显著，与全菌灭活苗免组比较差异不显著。表明pilA重组蛋白对同源菌株GH1.2的感染具有一定的保护效果

摘要:以悦目金蛛（Argiope amoena）丝腺SMART RACE cDNA文库为模板进行RT-PCR，克隆了1条大壶状腺丝蛋白（major ampullate spidroin, MaSp）基因cDNA序列。该条cDNA序列编码的氨基酸序列可区分为两部分：(1)富含丙氨酸的片段和富含甘氨酸的片段相间排列构成的重复氨基酸序列区，并且富含甘氨酸的片段中有脯氨酸分布；（2）约100个氨基酸残基组成的C末端非重复氨基酸序列区。把MaSp基因cDNA序列亚克隆到质粒pET28b(+)中，构建原核表达质粒pET28b(+)-MaSp，表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，用IPTG诱导表达。SDS-PAGE、氨基酸组成测定和N末端氨基酸序列测定的结果表明，表达产物为重组MaSp，表达量约为40mg/L。还对C末端非重复氨基酸序列对重组MaSp在水媒介中溶解性的影响进行了探讨。

摘要:从GenBank查询到的蚯蚓纤溶酶（earthworm fibrinolytic enzyme，EFE）基因序列中，只有AY438624翻译的蛋白质序列与天然EfP-Ⅰ在N-端具有较高的相似性。根据该基因的5′与3′序列设计引物，通过RT-PCR从赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)获得一个完整的基因（GenBank，DQ418454）。序列分析证明，由该基因编码蛋白质的N-末端与天然EfP-Ⅰ的N-末端的氨基酸顺序完全相同。ScanProsite prediction programs分析显示，该基因与AY438624相似性极高，二者均属于胰蛋白酶家族；不同的是，该基因编码蛋白质的序列中含有N-糖苷键的结构域，所以DQ418454是EfP-Ⅰ中的一个新基因。在此基础上，构建了该基因的原核表达载体pMAL-c2X-Efp-Ⅰ，并进行了转化、诱导和表达。Western blotting证明，表达产物同时具有MBP和EfP-Ⅰ的抗原特异性，是MBP和EfP-Ⅰ的融合蛋白（MBP-EfP-Ⅰ）。经亲和层析分离纯化的MBP-EfP-Ⅰ，在酪蛋白平板和纤维蛋白平板上表现出明显的纤溶酶活性。

摘要:通过计算机辅助分析了中国广西B/C重组亚型HIV-1病毒株的Env蛋白（共851氨基酸残基）氨基酸的疏水性、潜在的抗原表位，与其它亚型的Env蛋白在氨基酸组成的保守性方面进行了比较，选择了env基因的469-511aa，538-674aa和700-734aa三段保守性及抗原性都较强的氨基酸序列构建成嵌合基因，将嵌合基因构建到毕赤酵母Pichia pastoris表达载体pPICZαB中，利用甲醇诱导表达，对表达的蛋白进行了Westerblot和SDS-PAGE分析，结果表明，三段基因能在毕赤酵母Pichia pastoris中表达，产物为40kD的特异性诱导糖蛋白，通过Ni-sepharose 4B金属Ni螯合层析柱分离纯化表达蛋白，酶联免疫检测结果表明，纯化的抗原有很强的抗原特异性,可以用于HIV检测试剂的研制和开发。

摘要:利用亚硝基胍（MNNG）诱变方法筛选了一株深黄被孢霉潮霉素B敏感型菌株M6-22-4。采用PEG介导的方法，将含有E.coli潮霉素B抗性标记的PD4质粒转入敏感株M6-22-4原生质体，并在潮霉素B浓度为400μg/mL的选择培养基上筛选转化子，获得了1.6～2.8个转化子/μg质粒DNA的转化频率。稳定性实验表明，质粒线性化后所获得的转化子在PDA培养基上传代10代以后，转接到选择平板上有31.6%仍具有HmB抗性；随机挑选了3个转化子，通过PCR方法检测到潮霉素抗性基因的存在，Southern杂交发现，潮霉素抗性基因已经以1～2拷贝数整合到深黄被孢霉M6-22-4染色体上，这是深黄被孢霉转化系统的首次报道。

摘要:利用人脐血单个核细胞重建急性肝损伤小鼠肝组织，探索建立人-小鼠嵌合肝模型方法。15只SCID小鼠，以四氯化碳（CCL4）制备急性肝损伤模型，24h后行2/3肝切除，然后分为三个实验组：细胞移植组（7只）、阴性对照组（3只）及空白对照组（5只）；将人脐血单个核细胞悬液注入细胞移植组小鼠脾脏内，阴性对照组小鼠脾脏内注入等量磷酸盐缓冲液(PBS)，空白对照组不注射细胞悬液和PBS。术后7d、14d及21d取小鼠肝组织观察病理变化、检测人白蛋白（ALB）及细胞角蛋白19（CK19），同时检测小鼠血清及肝组织匀浆中人ALB含量。 全部小鼠表现出急性肝损伤组织学特征；细胞移植组小鼠术后7ｄ、14ｄ、21d肝组织内均见大量人ALB及CK19阳性表达细胞，血清及肝组织匀浆可检测出人ALB；阴性对照组小鼠肝组织未见人ALB及CK19阳性表达，血清及肝组织匀浆中未检测出人ALB。 人脐血单个核细胞在部分肝切除的急性肝损伤小鼠肝组织内可大量分化为人肝细胞及胆管细胞，在建立模型方面已取得关键突破。

摘要:应用差酶消化法和反复贴壁法在体外建立奶牛乳腺上皮细胞培养方法，以细胞流式术、免疫组化、免疫印迹、超微结构观察等方法对乳腺上皮细胞特性进行检测，并研究高温热刺激对乳腺细胞超微结构的影响。实验结果表明，运用本方法建立的奶牛乳腺细胞系上皮特性及遗传特征完备；41℃ 1h 的高温热刺激可使乳腺细胞染色质浓缩、线粒体肿胀、空泡化，形成凋亡小体，说明高温可以诱发乳腺细胞凋亡。

摘要:根据已报道的米根霉葡萄糖淀粉酶基因序列，通过PCR方法，从天然少根根霉的总DNA中克隆到含有四个内含子的葡萄糖淀粉酶基因。通过设计引物并采取重叠PCR方法删除内含子，获得了新的少根根霉葡萄糖淀粉酶(Rhizopus arrhizu glucoamylase,RaGA)cDNA序列(Accession number：DQ903853)。该基因在毕赤酵母中成功表达，表达产物具有较高的葡萄糖淀粉酶活性。

摘要:以毕赤酵母为表达系统, 建立生产重组巴曲酶的技术工艺路线。通过递归式PCR的方法, 人工合成了巴曲酶基因, 将其插入pPIC9表达质粒中, 转化至毕赤酵母GS115(his4), 筛选出的表达株经甲醇诱导, 表达了重组巴曲酶, 并得以纯化。从每升发酵液中可纯化得到10 mg重组巴曲酶, 其比活为238 NIH units/mg, 分子量为30.55kD。重组巴曲酶在体外可使纤维蛋白凝固, 在体内缩短小鼠出血时间。为开发重组的蛇毒类凝血酶止血剂打下了基础。

摘要:报道重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶（NAOase）的研究进展。重组NAOase由大肠杆菌argE基因编码，在重组菌BL21(DE3)-pET22b -argE中的表达量为32.5％，大多以无活性的包涵体存在。低温诱导可增大有活性的可溶表达部分的比例。可溶性NAOase经Ni-NTA凝胶亲和纯化后得到SDS-PAGE电泳纯的酶，比酶活为1193.2u/mg蛋白。诱导条件影响整菌蛋白的成分及比例。37℃诱导生成的包涵体经尿素梯度洗涤后纯度较22℃高。低的蛋白浓度和合适的氧化还原体系是影响复性的关键因素。稀释法和透析法皆可使包涵体部分复性。在合适的条件下以稀释法复性时，约有17.78%包涵体可顺利复活。包涵体经尿素洗涤、溶解、Ni-NTA凝胶柱亲和纯化后，获得了高纯度的NAOase。

摘要:初步探讨在小鼠受精卵早期发育过程中PKB/Akt对p21 蛋白表达及定位的影响。通过显微操作技术注射野生型、持续激活型及激酶失活型的PKB的mRNA，用免疫荧光方法检测p21蛋白的细胞定位、Western blot 方法检测p21蛋白的表达。结果显示在注射不同形式的PKB mRNA 后p21蛋白的表达无明显差别，但是细胞定位发生改变，PKB被激活后，p21蛋白滞留在胞浆中。因而初步认为在小鼠受精卵中，PKB/Akt通过影响p21 的细胞定位而影响细胞周期的进程。

摘要:研究了添加十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）对吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）合成谷氨酰胺转胺酶的影响。结果表明，添加CTAB可以提高发酵过程中谷氨酰胺转胺酶的酶活，摇瓶培养中，CTAB的最佳添加时间和添加量分别为32h和1%，发酵终了时，谷氨酰胺转胺酶酶活最高达5.04u/mL，比对照提高了21.8%。初步研究表明，CTAB的主要作用是促使谷氨酰胺转胺酶的酶原转化为成熟酶，因此，在发酵过程中添加适当浓度的CTAB，可使酶原快速、完全地转化为成熟的MTG，解除酶原的产物抑制作用，促进了细胞产酶。

摘要:微囊化重组基因细胞移植治疗肿瘤是一种新兴的肿瘤基因治疗方法，然而由于目前微囊化细胞规模化制备和培养技术还不成熟,阻碍了其在临床治疗中的推广与应用。以重组CHO细胞为模型，考察了不同的微囊制备和培养条件对微囊化细胞生长和内皮抑素表达的影响。实验表明，种子细胞所处的生长阶段和细胞接种密度对微囊化细胞生长和内皮抑素表达的影响较大，对数生长期的细胞进行包囊并且细胞接种密度为1×10⁶～2×10⁶cells/mL 微囊时微囊内细胞生长良好、内皮抑素表达量高。微囊制备时间对细胞活性和内皮抑素表达也有较大的影响，制备时间延长对细胞的损伤增大，因此制备时间应控制在5h以内。生物微胶囊在制备过程中会造成细胞损伤，而体外培养是恢复细胞活性的良好方法，在培养过程中微囊接种量为5%时对细胞生长和内皮抑素表达有利。

摘要:中试规模纯化重组人核苷二磷酸激酶A（rhNDPK-A）。菌体高压匀浆，然后微滤去除菌体碎片，超滤浓缩，所得样品上样DEAE-sepharose Fast Flow，收集目的峰，上样Cibacron Blue 3GA Sepharose CL-4B，含ATP的缓冲液洗脱目的蛋白，超滤精制。结果表明，1500g菌体经过2次匀浆后，所得匀浆液中含NDPK 47.6g，经过微滤超滤处理后，可回收目的蛋白27.3g。再经过两步柱层析及超滤精制后，最终可得纯度为96.3%的目的蛋白17.2g，总回收率为36.2%，每100 g湿菌体的蛋白产率为1.15g。比较每个步骤的回收率，发现精制>亲和层析>离子交换层析>样品前处理过程。与前期报道发酵工艺联用，rhNDPK-A的纯化产量达到510mg/L。工艺简便、得率高的rhNDPK-A纯化工艺的建立为NDPK的应用开发提供了物质基础；另外，本文结果也提示，对于非分泌型重组蛋白来说，影响目的蛋白回收的最主要因素可能不是柱层析，而是样品前处理过程。

摘要:采用主成分分析法对样本数据集进行预处理，将得到的新样本数据集输入支持向量机，籍均匀设计，构建了几丁质酶氨基酸组成和最适pH的数学模型。当惩罚系数C为10，epsilon值为0.7，Gamma值为0.5，模型对pH值拟合的平均绝对百分比误差为3.76%，同时具有良好的预测效果，预测的平均绝对误差为0.42 个pH单位。该方法比用BP神经网络方法效果更佳。

摘要:5-氨基乙酰丙酸（5-aminolevulinate，ALA）由5-氨基乙酰丙酸合酶（5-aminolevulinate synthase，ALAS）催化产生。利用重组细菌在大肠杆菌合成ALA已有不少研究。重组真核生物ALAS在大肠杆菌合成ALA的研究没有报道。酿酒酵母ALAS在大肠杆菌重组表达，在摇瓶培养条件下，分析了胞外ALA的产量，重组菌的生长状况和细胞中ALAS的活性，利用两种国产树脂纯化ALA，毛细管电泳分析确定ALA纯度在LB培养基中，初始pH 6.5，含有20mmol/L的酮戊酸、20mmol/L琥珀酸和20mmol/L的甘氨酸，37℃下诱导培养12h，胞外ALA的产量为162mg /L培养基。纯化的ALA纯度达到90%。

摘要:提取根瘤菌 Mesorhizobium. loti基因组，克隆编码N-乙酰氨基葡萄糖转移酶nodC基因，插入质粒pUC19的lac启动子的下游，构建并筛选出能够合成几丁寡糖的重组大肠杆菌DC_L-3。利用优化的MMYNG培养基，重组大肠杆菌DC_L-3在10L发酵罐中培养26h后，培养液菌体浓度测定OD=10.8，几丁寡糖得率达到526mg/L。收集重组细菌的细胞并煮沸破碎，利用活性炭的吸附和P4凝胶层析对几丁寡糖产物进行分离纯化。纯化产物的液质分析（LC-ESI-MS）结果表明：主要寡糖产物为几丁四糖（m/z, 831［M+H］⁺）和几丁五糖（m/z, 1034［M+H］⁺）。

摘要:为了在宿主菌Acinetobactersp. DWC6中构建低温菌蛋白表达载体，以pBR322质粒为基础，去除质粒上β-内酰胺酶基因的启动子片段，取而代之为来源于质粒pJRD215的卡那霉素抗性基因片段，并在pBR322中插入Acinetobacter菌属特异性ori的DNA片段，构建了能在Acinetobacter sp. DWC6和E. coli中正常复制的启动子探针质粒pBAP1。通过在质粒pBAP1中的β-内酰胺酶基因上游随机导入Acinetobacter sp. DWC6基因组片段，通过检测宿主细胞的氨苄青霉素抗性和β-内酰胺酶活性，来筛选强启动子片段，并分析了启动子探针质粒载体的功能及启动子的强度。