摘要:重组腺相关病毒载体 (rAAV) 是基因治疗临床应用载体的选择之一。在简述野生型AAV基因组结构和复制机制的基础上，阐述了AAV包装过程中两个主要事件：衣壳蛋白的装配和基因组DNA的衣壳化。虽然对AAV的包装机制总体上已有一定的认识，但其详细的分子机制、构效关系仍需完善和充实。AAV病毒本身相关机制的深入研究有助于改善rAAV载体的制备技术，促进rAAV基因药物研发。

摘要:DNA稳定同位素探针 (DNA-SIP) 是一种新兴的技术，通过将同位素稳定结合到特定的底物来确定环境中微生物的作用。DNA-SIP与宏基因组学结合可以让某些微生物的特性与其特殊新陈代谢联系在一起，不仅可以从宏基因组库里检测到低含量的微生物，而且加速了对新的酶类和其他生物活性物质的发现。以下总结了SIP-宏基因组学技术的原理、应用及研究进展，并讨论了其在环境微生物学和生物技术的应用前景。

摘要:阳离子转运蛋白在调节细胞质阳离子浓度过程中发挥关键作用。液泡是一个储存多种离子的重要细胞器，阳离子 (Ca2+)/H+反向转运蛋白CAXs定位在液泡膜上，主要参与Ca2+向液泡的转运，也参与其他阳离子的转运。近年来，植物中分离鉴定了多个CAX基因，植物CAXs主要有4个功能域：NRR通过自抑制机制调节Ca2+转运活性，CaD和C功能域分别赋予CAXs的Ca2+和Mn2+专一性转运活性，D功能域可调节细胞质pH。拟南芥AtCAXs参与植物的生长发育和胁迫适应过程，AtCAX3主要在盐胁迫下转运Ca2+，At

摘要:为了获得鸡法氏囊B淋巴细胞中与鸡传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2相互作用的蛋白质，利用酵母双杂交系统，用IBDV VP2蛋白为诱饵蛋白，筛选鸡法氏囊B淋巴细胞cDNA表达文库。将表达文库质粒转化含IBDV VP2诱饵质粒的酵母感受态细胞，检测报告基因在相应的营养缺陷型培养基 (SD/-Leu/-Trp/-His) 上表达情况，进一步经β-半乳糖苷酶报告基因检测，筛选到16个阳性克隆。提取阳性克隆质粒，经测序分析获得5个原鸡基因序列，分别是：线粒体DNA、蛋白质O位N-乙酰葡萄糖胺糖基化转移酶、肿瘤

摘要:为了研究金黄色葡萄球菌表面Isdb蛋白的免疫原性，应用PCR方法扩增出金黄色葡萄球菌Wood46株的isdb 基因并进行序列分析，再将isdb 基因插入到pET32-a(+) 载体上，构建了pET32-a(+)-isdb重组质粒，将重组质粒转化到宿主菌大肠杆菌BL21中并诱导表达和纯化Isdb蛋白。用纯化的Isdb蛋白免疫小鼠，检测小鼠血清中抗体水平；在二次免疫之后的第2周，用金黄色葡萄球菌Wood46、HLJ23-1株对小鼠攻毒，每组8只小鼠。研究结果发现：isdb基因在不同菌株中高度保守；Isdb蛋白

摘要:构建一株酿酒酵母SNF4基因缺失菌株并研究其对乙醇产量的影响。扩增带有SNF4基因上下游同源序列和Kanr筛选标记的SNF4基因敲除组件，转化到酿酒酵母YS2获得阳性克隆子，然后将质粒pSH65转到阳性克隆子中，半乳糖诱导pSH65表达Cre酶切除Kanr筛选标记，获得SNF4等位基因完全缺失菌株YS2-△SNF4。发酵实验结果表明，缺失菌株YS2-△SNF4乙醇产量较出发菌株提高了7.57％。利用Cre-LoxP系统，成功构建了SNF4等位基因完全缺失菌株并提高乙醇产生量。

摘要:阿托伐他汀可通过抑制HMG-CoA还原酶与底物的结合来抑制胆固醇的合成，而 (R)-3-羟基-5-邻苯二甲酰亚胺基戊酸乙酯是阿托伐他汀合成的重要中间体。通过对实验室保藏菌种进行筛选，得到一株巴氏毕赤酵母X-33可将5-邻苯二甲酰亚胺-3-氧代戊酸乙酯还原为 (R)-3-羟基-5-邻苯二甲酰亚胺基戊酸乙酯。在磷酸盐缓冲液体系中考察了初始底物浓度、反应时间、辅助底物、葡萄糖添加量、pH、温度等因素对产物收率和对映体选择性的影响，获得了较佳的反应条件。选择底物投料量为7 g/L时，当菌体浓度120 g/L，葡萄

摘要:根据蛋白质变性后结构变化的特点和荧光探针8-苯胺基-1-萘磺酸 (8-Anilino-1-naphthalenesulfonic acid，ANS) 的特性，建立了一种快捷而准确的脂肪酶热稳定性 (Tm) 测定的新方法——ANS脂肪酶稳定性测定法，即将脂肪酶在25 ℃~65 ℃的不同温度下保温30 min后，加入到ANS反应体系 (0.2 mg/mL酶蛋白，0.05 mmol/L ANS，20 mmol/L Tris-HCl (pH 7.2)，100~500 mmol/L NaCl) 中。在激发波长378

摘要:为了掌握蒸汽爆破玉米秸秆的酶解特性，研究了不同底物浓度、酶浓度、温度对反应速率的影响。运用米氏方程对酶解动力学过程进行拟合，结果表明，纤维素酶对该玉米秸秆的水解反应在反应前3 h符合一级反应，可用米氏方程对其进行拟合。在转速为120 r/min、酶浓度为1.2 FPU/mL、pH 5.0、温度为45 ℃时米氏常数Km为11.71 g/L，最大反应速率Vm为1.5 g/(L·h)。确立了包括底物浓度、酶浓度、温度在内的酶解动力学模型，该模型适合温度为30 ℃~50 ℃。

摘要:以生物量和虾青素产量为指标，考察法夫酵母多批次半连续培养产虾青素的稳定性。实验结果显示，在摇瓶上分别以4 d和5 d为周期反复分批培养法夫酵母，虾青素产量呈现先增加再下降的趋势，但第2代至第7代虾青素产量仍高于第1代，并且4 d为周期的虾青素平均产量略高于5 d的。在5 L罐法夫酵母进行反复分批补料发酵中，不管是补加30％的葡萄糖还是补加30％的淀粉水解糖，第2个批次发酵的生物量和虾青素产量均达到第1个批次的水平，表明菌种稳定性较好。

摘要:钝顶螺旋藻在持续照光和中等频率 (0.01~20 Hz) 的光/暗交替照光下的放氧特性对光生物反应器的设计和操作具有重要意义。构建了一套可实现光/暗交替的光生物反应器系统对此进行研究，结果显示：根据与放氧速率的关系，可以将光强分为4个区：光限制区 (0~335 μmol/(m2·s))，过渡区 (335~875 μmol/(m2·s))，光饱和区 (875~2 775 μmol/(m2·s)) 以及光抑制区 (2 775 μmol/(m2·s)以上)。提高光/暗频率能否提高微藻光合速率取决于所采用的光强和

摘要:为了优化坛紫菜粗提工艺以减轻纯化的压力，研究了我国主要经济红藻之一坛紫菜藻红蛋白大规模制备方法。实验采用“溶胀+组织捣碎”法破碎坛紫菜叶状体细胞，对比了多次硫酸铵梯度盐析对破碎液中藻红蛋白的影响，并进一步用羟基磷灰石层析制备藻红蛋白，最后对所得蛋白做了光谱和电泳鉴定。结果表明，经过4次盐析，藻红蛋白吸收光谱纯度达到0.9 (A564/A280)，每次的最佳盐析浓度分别为15％、50％、10％和40％；7 kg阴干紫菜经过4次盐析和1次羟基磷灰石层析后可获得507.82 mg藻红蛋白 (A564/A280＞

摘要:阿特拉津氯水解酶定向改造的关键是开发一种廉价的、表型改变明显的高通量筛选方法。利用高错误倾向PCR和DNA洗牌相结合的突变方法，对来源于假单胞菌ADP和节杆菌AD1的阿特拉津氯水解酶基因进行随机突变，以雨生红球藻为受体、以阿特拉津为选择压力对突变文库进行高通量筛选。筛选到的12个突变子序列分析显示，突变均为点替换，位点分散在全基因上，是在高错误倾向PCR及DNA洗牌过程中逐渐累积形成的。酶活力分析显示，突变子的酶活力均高于野生株，在添加1.0 mg/L阿特拉津培养液中的活力是野生株的1.9~3.6倍，在添

摘要:为了优选接种物和加速厌氧氨氧化 (Anammox) 反应器启动，分别以厌氧产甲烷污泥 (Anaerobic methanogenic sludge，AMS)、新鲜厌氧氨氧化污泥 (Fresh Anammox sludge，FAS) 和储藏厌氧氨氧化污泥 (Stored Anammox sludge，SAS) 作为接种物，研究了厌氧氨氧化膨胀颗粒污泥床 (Anammox-EGSB) 反应器 (R1、R2和R3) 的启动性能。结果表明：3种接种物均能成功启动Anammox-EGSB反应器，启动性能的优劣次序为

摘要:旨在挖掘用于鉴定金黄色葡萄球菌的高特异性靶点及其PCR检测引物。采用C++语言编程，以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus MRSA 252基因组编码序列为对象，对2 656个可编码区进行分析，获得特异性靶点序列，并设计PCR扩增引物。对包括葡萄球菌属11个种及其他细菌属在内的共计137株细菌验证引物特异性，筛选获得9个DNA序列，并设计了4对引物。经验证2对引物的特异性较好，其中引物SA3的基因组DNA检测限为13.7 fg/μL，菌体检测限为9.25×102 CFU/mL。结果验证

摘要:近年来，因病毒侵害人类每年都要蒙受巨大的经济损失和社会损失。犬肾细胞MDCK以其具有的培养容易、增殖快、流感病毒感染效率高等特点，成为适用于流感病毒疫苗生产的重要细胞系之一。以MDCK细胞为研究对象，在自制无血清培养基中成功实现了MDCK细胞从有血清培养到无血清培养的驯化；并通过单细胞悬浮培养驯化过程实现了MDCK细胞的无血清单细胞悬浮培养，获得了适于无血清单细胞悬浮生长的ssf-MDCK细胞株，无血清单细胞悬浮批培养最大活细胞密度可达3.81×106 cells/mL，最大比生长速率可达0.056 h?

摘要:旨在克隆、表达与纯化类弹性蛋白多肽，并测定类弹性蛋白的相变温度对不同的盐敏感程度。从头设计了类弹性蛋白多肽的序列并人工合成其编码基因片段，克隆至改造后的表达载体pET-22b(+) 中，构建重组表达载体，转化至大肠杆菌BL21(DE3) 中并诱导表达，采用可逆相变循环经高速离心对其进行纯化，并考察了盐类型及浓度对类弹性蛋白相变温度的影响。结果表明：0.4 mmol/L的Na2CO3能使25 μmol/L类弹性蛋白多肽 [KV8F-20] 相变温度降低至19 ℃，此类弹性蛋白多肽序列有望开发成一新型纯化标签

摘要:旨在深入研究人类天冬胺酰基β-羟化酶 (HAAH) 在肿瘤早期诊断中的作用机制。应用RT-PCR方法从肝癌组织中获得人类天冬胺酰基β-羟化酶HAAH编码基因，并在原核表达载体pBV-IL1中进行融合表达，将Ni柱纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠，获得了3株稳定的阳性单克隆细胞株 (H3/E10、E4/F12、G4/D8)，间接ELISA和Western blotting鉴定单抗的特异性和灵敏度，以单抗H3/E10介导的间接免疫荧光检测HAAH在各种肿瘤细胞系中的表达，可见特异的荧光。试验中成功构建了可表