摘要:丝素蛋白是天然高分子纤维蛋白，具有良好的物理和机械力学性能及生物相容性，因而在组织工程领域有着广阔的应用前景。文中对丝素蛋白的化学组成、分子结构特点、提取方法以及利用静电纺丝技术在组织工程化支架构建中的应用作了概述。总结了丝素蛋白在用于组织工程材料上的性能和优势以及在人工血管、皮肤、骨组织等工程化支架方面的应用情况，探讨了丝素蛋白支架对细胞在其上生长、增殖和功能的影响，同时对丝素蛋白在组织工程化食道支架及其他再生医学上的应用前景进行了展望。

摘要:从海洋生物中筛选提取有价值的酶类，开发海洋多糖降解产物，已成为海洋生物资源开发的一个重要方面。因此，近年来对于海藻工具酶之一的褐藻胶裂解酶及其降解产物——褐藻寡糖的研究日益受到人们的普遍关注。从褐藻胶裂解酶的来源、分类、底物专一性、作用方式及结构与机理研究、酶活力测定和酶学性质等方面，结合本课题组的研究工作综述近十年来有关褐藻胶裂解酶的研究进展。

摘要:抗菌肽是生物体内产生的一种具有生物活性的小分子多肽，具有广谱抗细菌、抗病毒、抗真菌甚至抗癌作用。SMAP-29是来源于绵羊骨髓细胞，包含29个氨基酸的Cathelicidin类α-螺旋结构抗菌肽。SMAP-29具有多种生物活性，包括抗革兰氏阳/阴性菌、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫、抗螺旋体、抗衣原体和中和内毒素活性，并且具有作用机制独特、快速杀灭细菌的特点。以下综述了SMAP-29抗菌肽家族的基因和蛋白结构、结构与活性关系、作用机制、生物功能、基因重组表达，重点阐述了SMAP-29结构、分子设计的必要性和基于

摘要:为获得不依赖油水界面激活的黑曲霉脂肪酶 (ANL) 突变体，在生物信息学分析基础上，对黑曲霉脂肪酶盖子结构域两侧铰链区的氨基酸残基进行了置换突变，获得两个黑曲霉脂肪酶突变体 (ANL-Ser84Gly和ANL-Asp99Pro)。对不同浓度对硝基苯丁酸酯的水解活性检测结果表明：ANL-Ser84Gly的催化活性仍依赖油水界面，而ANL-Asp99Pro的催化活性不再依赖油水界面。底物特异性检测结果表明：较ANL而言，ANL-Ser84Gly的比活力显著降低，其水解对硝基苯棕榈酸酯、对硝基苯豆蔻酸酯、对硝基

摘要:植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白与逆境应答密切相关，在甘蔗热带种Saccharum officinarum拔地拉Badila中克隆到一个具有A20/AN1锌指结构域的锌指蛋白基因ShSAP1。为研究ShSAP1的基因结构和表达特性，采用PCR和Southern blotting分析了ShSAP1的基因组结构，通过半定量RT-PCR对ShSAP1在甘蔗不同部位、不同胁迫和不同激素处理下的表达模式进行了分析。结果表明，ShSAP1的5'UTR区有两段内含子，大小分别为202 bp和1 052 bp，在

摘要:为评价在小鼠体内表达流感病毒M1和HA基因诱导的免疫反应，制备共表达H5N1亚型禽流感病毒 (A/Anhui/1/2005) 全长基质蛋白1 (M1) 基因和血凝素 (HA) 基因的重组DNA疫苗pStar-M1/HA和重组腺病毒载体疫苗Ad-M1/HA，将其按初免-加强程序免疫BALB/c小鼠，共免疫4次，每次间隔14 d。第1、3次用DNA疫苗，第2、4次用重组腺病毒载体疫苗，每次免疫前及末次免疫后14 d采集小鼠血清用于检测体液免疫应答，末次免疫后14 d采集小鼠脾淋巴细胞用于检测细胞免疫应答。血凝

摘要:以大肠杆菌8099为宿主自医院污水中分离出一株肠杆菌噬菌体IME08，其遗传物质经RNA酶、DNA酶处理证实其为DNA，用限制性内切酶处理该DNA证实其为双链DNA。利用随机引物PCR技术扩增并克隆该噬菌体基因组的随机片段，经测序后同源比对，判断该噬菌体是一株新的T4-like噬菌体。根据4株T4-like噬菌体 (T4，JS98，T2及K3) 宿主识别基因 (g37) 5'端的高度保守序列，采用随机PCR与巢式PCR结合的“基因组跳跃”策略快速克隆出了该噬菌体的宿主识别基因g37和g38。

摘要:在恶性肿瘤的治疗中，肠毒素C2 (SEC2) 的临床应用由于其副作用而被严重限制。利用SEC2基因截短技术，获得保留T细胞刺激活力又不引发催吐效应的SEC2突变株，可有效解决这个问题。根据噻唑蓝比色法 (MTT) 分析结果，新型截短肠毒素C2突变株 (NSM) 可显著刺激T细胞增殖，并且可显著抑制人大肠癌细胞 (CX-1) 和人乳腺癌细胞 (MCF-7) 生长。NSM的T细胞刺激能力和抑瘤效果与SEC2相似。动物研究结果证明NSM不再引发呕吐效应，且可显著抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长。因此，这种可抑制肿瘤细胞生

摘要:表达于b-胰岛细胞上的Kv2.1钾通道电流负责动作电位的复极化，从而调节胰岛素的分泌，是治疗2型糖尿病的有效作用靶点。敬钊毒素-XI(JZTX-XI) 是从敬钊缨毛蛛Chilobrachys jingzhao粗毒中分离纯化到的一种新型的肽类神经毒素，能够抑制非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv2.1钾通道电流。为了研究JZTX-XI的结构与功能关系，用芴甲氧羰基 (Fomc) 固相多肽合成方法合成了野生型JZTX-XI和突变体R3A-JZTX-XI，结合反相HPLC和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行检测，从而得

摘要:人类博卡病毒 (Human bocavirus，HBoV) 是继细小病毒B19之后，第2个被发现可引起人类疾病的细小病毒。通过PCR扩增方法从患有下呼吸道感染的患儿痰液中鉴定HBoV，以鉴定的阳性样本为模板，利用分子生物学方法构建病毒基因组克隆并进行序列分析。2007年10月?2009年3月从湖北省妇幼保健院共收集941例下呼吸道感染患儿的痰液标本，检测到33份HBoV阳性样品，阳性率为3.51％ (33/941)；其中1岁以下婴幼儿患者占阳性样72.7％；构建了含有HBoV中间大片段基因克隆WHL-1，

摘要:白念珠菌Candida albicans对环境pH的适应能力与其致病性有密切关系，钙信号转导途径介导许多环境压力的应答并伴随胞内钙离子浓度的瞬间变化。通过构建钙通道基因CCH1和MID1的缺失突变株，在碱性pH条件下，研究其对胞内钙内流的影响以及转录因子Crz1p对CCH1和MID1基因的调控作用。使用二步法PCR介导的基因敲除技术构建cch1Δ/Δ和mid1Δ/Δ突变菌株，利用流式细胞术比较野生型和突变型菌株在碱性pH条件刺激下胞内钙的瞬间变化，进一步构建pPHO89-LacZ重组质粒并利用β-半乳糖苷

摘要:为了构建改良型痘苗病毒安卡拉株表达系统可删除筛选标记的双表达穿梭载体，利用Cre/LoxP DNA重组系统以及本实验室表达Cre酶的BHK-21细胞系 (BHK-Cre)，以大肠杆菌黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (Eco gpt) 为筛选标记构建可删除筛选标记的双表达穿梭载体pLR-gpt。将Eco gpt 基因以及调控其表达的启动子基因置于2个同向的LoxP位点之间，2个独立的多克隆位点位于2个LoxP位点之外，最终获得的重组病毒可以在BHK-Cre细胞系上删除筛选标记Eco gpt。为了验证系统的有效

摘要:利用哺乳动物细胞表达系统，稳定表达和纯化高生物学活性的人重组血管内皮生长因子 (VEGF165) 蛋白。将VEGF165克隆于表达载体pCDNA4.0，与T-GS载体共同转染CHO-S (中国仓鼠卵巢细胞) 细胞，MSX (Methionine sulphoximine) 加压筛选高表达细胞株，5 L发酵罐培养，细胞培养上清液通过三步纯化得到rhVEGF165蛋白，通过Western blotting、Biacore和人脐静脉内皮细胞增殖实验等对表达蛋白的特异性、亲和力及生物学活性等进行检测。所建立的细胞

摘要:为制备灵敏度高，特异性强的抗吡虫啉单克隆抗体，建立经济、快速、准确的吡虫啉残留免疫学分析方法，采用分子模拟技术分析吡虫啉及其类似农药的电荷分布后，选择1-[6-(2-羧乙硫基-3-吡啶)甲基]-N-硝基-2-咪唑啉亚胺 (H1) 作为免疫半抗原，1-(6-氯-3-吡啶甲基)-3-羧丙基-N-硝基-2-咪唑啉亚胺 (H2) 作为包被半抗原，利用NHS酯法将H1和H2分别与牛血清蛋白 (BSA) 和卵清蛋白 (OVA) 偶联合成免疫原与包被原。免疫BALB/c小鼠后，采用常规杂交瘤技术共获得2株稳定分泌抗吡虫

摘要:SUMO融合系统已成为目前大肠杆菌重组蛋白生产的重要手段，但在载体构建效率和蛋白可溶性等方面仍有待改进。本研究在PCR克隆酿酒酵母SUMO基因Smt3(Sm) 时意外发现Sm具有组成型原核启动子活性；而且经软莓BPROM程序预测发现大多数物种SUMO基因编码区都具有依赖s70的原核启动子。进一步通过整合Sm启动子和Sm 3￠末端StuⅠ位点特性以及引入His标签和超酸增溶标签，构建了基于Sm’-LacZα融合基因的一系列通用克隆表达载体，并通过蓝白斑筛选和SDS-PAGE分析进行了多个靶蛋白基因的克隆和表

摘要:为了构建包含牛c-myc基因编码序列的重组载体，以胎牛原始生殖嵴为材料，用RT-PCR方法克隆出牛c-myc 基因的编码序列，将其亚克隆至pMD19-T载体，再从酶切鉴定和测序正确的质粒上切下目的片段，定向克隆到pIRES2-AcGFP1-Nuc表达载体上，挑选序列正确的重组真核表达质粒转染牛皮肤成纤维细胞，用RT-PCR和Western blotting分别检测c-myc mRNA和蛋白的表达。结果表明，从胎牛原始生殖嵴中正确克隆了c-myc基因的全长编码序列，所构建的重组质粒能够在皮肤成纤维细胞中有效