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摘要:Toll样受体是机体天然免疫系统最重要的模式识别受体之一，通过识别病原寄生虫的病原相关分子模式，活化依赖和非依赖于髓样分化因子88的信号转导通路，诱导干扰素、炎症因子、趋化因子等的表达以及树突状细胞的成熟，抵御病原寄生虫的感染。因此，以下综述了Toll样受体对原病寄生虫，尤其对动物寄生性原虫与蠕虫感染的模式识别与天然免疫应答机制，以进一步理解病原寄生虫与宿主相互作用的复杂性，为寄生虫病的有效防治提供理论参考。

摘要:人羧酸酯酶1 (Human carboxylesterase 1，HCE1) 是丝氨酸水解酶多基因家族的重要成员之一，它是一种参与肝脏外源物质解毒及代谢的肝羧酸酯酶。HCE1还能参与人体内胆固醇酯和游离脂肪酸的运输和代谢过程，与肝细胞肝癌的发生发展密切相关。文中就近十年来人羧酸酯酶1的分子结构、药物代谢、毒物代谢、脂质代谢及早期诊断肝细胞肝癌等功能方面的相关研究进展进行综述。

摘要:菌蜕是革兰氏阴性菌在噬菌体Phix174的溶菌基因E的作用下形成的细菌空壳，通常由λpL/pR-cI857温控系统通过调控E基因的表达制备。通过重叠PCR技术，将λpL/pR-cI857温控系统中λpR启动子的第2个操纵基因 (OR2) 的第9位碱基由T突变为C (T→C)。溶菌试验结果表明，突变后的λpL/pR-cI857系统在37 ℃时仍能稳定抑制基因E的表达，对大肠杆菌的溶菌率为99.9％。通过对λpR启动子的改造，扩大了λpL/pR-cI857温控系统的温度调控范围，为菌蜕疫苗的研制提供了参考。

摘要:以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆 (rHuN4-F112) 作为载体，将O型口蹄疫病毒 (FMDV) VP1基因的421~480nt (141~160aa) 和598~639nt (200~213aa) 两优势保护性抗原表位串联成的目的基因，通过突变PCR的方法插入Nsp2中的508~532位缺失区域，经体外转录后转染至BHK-21细胞中培养36 h，将上清接种至MARC-145细胞中培养，并在MARC-145细胞中连续传代，拯救重组病毒。经RT-PCR扩增，MluⅠ酶切及测序验证，结果表明插入的外源基因及人为突变的MluⅠ分子标记都正确，说明重组病毒拯救成功，且该重组病毒能够在MARC-145细胞中稳定传代，将此重组病毒命名为rPRRSV-F112-O/VP1ep。rPRRSV-F112-O/VP1ep能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变，间接免疫荧光检测表明外源基因在该病毒中成功获得了表达。经过生物学特性分析，该病毒的TCID50=-log10-6.75/0.1 mL, 且在MARC-145细胞中整体生长速度与其亲本病毒rHuN4-F112(△508-532) 相似，但明显高于rHuN4-F112病毒。

摘要:以来源于米曲霉Aspergillus oryzae的11家族常温木聚糖酶AoXyn11A为母本，将其N端替换成同一家族耐热木聚糖酶EvXyn11TS的对应片段，构建出耐热杂合木聚糖酶AEx11A。将AoXyn11A和AEx11A基因分别在毕赤酵母GS115中进行表达并分析比较温度对表达产物酶活性的影响。结果表明，AEx11A的最适温度Topt为75 ℃，在70 ℃的半衰期t1/270为197 min，较AoXyn11A (Topt=50 ℃，t1/270=1.0 min) 显著提高。通过对AEx11A结构的同源建模及其与AoXyn11A结构的比对，发现在AEx11A的N端引入了一个二硫键 (Cys5–Cys32)。利用定点突变法将其5位的半胱氨酸突变为苏氨酸 (C5T)，去除该二硫键，以探讨其对AEx11A热稳定性的影响。分析表明，突变酶 (AEx11AC5T) 的Topt由突变前的75 ℃降为60 ℃，其t1/270和t1/280也分别由197 min和25 min缩短为3.0 min和1.0 min。

摘要:利用重组大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)/pET-SPase发酵生产蔗糖磷酸化酶 (EC 2.4.1.7，Sucrose phosphorylase，SPase)。收集的菌体经高压破碎后离心得到粗酶液，通过镍NTA亲和层析、超滤除盐后得到电泳纯的SPase，纯化后的SPase的比酶活是原来的2.1倍，酶活回收率达到82.7％。经SDS-PAGE电泳测定，重组SPase的分子量约为59 kDa。该酶在不高于37 ℃，pH 6.0~6.7的条件下比较稳定，最适催化温度与最适催化pH分别为37 ℃，pH 6.7，该酶对蔗糖的米氏常数 (Km) 为7.3 mmol/L，最大反应速率 (Vmax) 为0.2 μmol/(min·mg)。此外文中还以蔗糖和氢醌为底物，利用重组SPase催化合成α-熊果苷。其最佳反应条件为：20％蔗糖，200 U/mL的酶液，1.6％氢醌，pH 6.0~6.5，25 ℃，反应21 h。α-熊果苷的摩尔产率为78.3％，α-熊果苷的产量为31 g/L。

摘要:弧菌是海水养殖环境中常见的条件性致病菌，弧菌病的暴发给水产养殖业造成了严重损失。鉴于水生动物尤其是鱼类弧菌病的发生常常是多种 (血清型或亚种) 弧菌的混合感染，筛选具有潜在的交叉保护性蛋白抗原，作为制备多价疫苗或联合疫苗的侯选成分具有重要意义。文中从患病大黄鱼中分离到8株弧菌，经生理生化和分子生物学鉴定分别为6株哈维氏弧菌Vibrio harveyi，1株溶藻弧菌Vibrio alginolyticus和1株副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus。选择典型的不同种的弧菌为代表，提取其外膜蛋白，经SDS-PAGE和Western blotting分析，确定它们大约在45 kDa、35 kDa、22 kDa处出现了3条共同的免疫印迹条带，表明它们很有可能含有共同的能够彼此交叉保护的抗原。利用双向电泳和免疫印迹相结合的方法，借助于MALDI-TOF-MS质谱分析技术，发现溶藻弧菌V. alginolyticus的一种功能未知的孔蛋白 (Porin, GenBank Accession No. ZP_01260407) 和副溶血弧菌V. parahaemolyticus的一种麦芽糖孔蛋白的前体蛋白 (Maltoporin precursor，GenBank Accession No. NP_801154) 能够和哈维氏弧菌V. harveyi全菌多抗产生免疫反应，表明这两种蛋白可以作为3种弧菌的交叉保护性抗原，以此制备的疫苗可望对3种弧菌的感染产生交叉保护作用。

摘要:集胞藻PCC6803野生型和其脂酰ACP合酶敲除突变株的自由脂肪酸含量和组成表明膜脂的重构和降解是细胞内自由脂肪酸的来源之一。在这一过程中脂肪酶起到关键性作用。通过基因组数据库检索，发现集胞藻PCC6803基因组中只有一个脂肪酶编码基因sll1969，但是还没有其功能相关的生化证据。为了确定该基因的功能及其在脂肪酸代谢途径中的作用，加深对集胞藻PCC6803脂肪酸代谢途径的了解，文中将sll1969基因在大肠杆菌中过表达和体外纯化，得到重组蛋白Sll1969，并对其酶学性质进行初步分析。在30 ℃条件下，测得Sll1969以对硝基苯丁酸酯作为底物时的Km和kcat值分别为 (1.16±0.01) mmol/L和 (332.8±10.0)/min；该脂肪酶的最适反应温度为55 ℃。通过比较分析sll1969突变株中脂肪酸含量和组成变化，发现sll1969的表达量与细胞自由脂肪酸的产量呈正相关，但Sll1969不是细胞中唯一的脂肪酶。

摘要:为比较两种筛选标记基因生产转人乳铁蛋白 (hLF) 基因克隆山羊的效率，利用单 (新霉素抗性基因，Neor)、双 (新霉素抗性和绿色荧光蛋白基因，Neor/GFP) 标记基因筛选转基因的供核细胞，并制作体细胞核移植转基因山羊。山羊胎儿成纤维细胞电转染单标记基因表达载体 (pBLC14) 或双标记基因表达载体 (pAPLM)，分别有58.8％ (20/34) 和86.7％ (26/30) 的抗性细胞株检测到外源基因；转染pAPLM的细胞传代培养后，仅有20％ (6/30) 株细胞在传代中所有细胞均能观察到荧光；分别以pBLC14和pAPLM的细胞株作为供核细胞进行体细胞核移植，共获得806枚重构胚胎，胚胎移植受体后35 d、60 d妊娠率分别为53.8％、26.9％和39.1％、21.7％，最终分别产下5只 (1.9％) 和7只 (1.4％) 克隆山羊；经PCR及Southern blotting检测，所有出生山羊均整合有外源基因。结果显示，以单、双标记基因筛选供核细胞，其重构胚融合率、怀孕率和克隆动物出生率差异不显著 (P>0.05)，Neor/GFP双标记基因能准确、有效地用于转基因供核细胞筛选。同时，结果也表明Neor/GFP双标记基因转染的体细胞作为供核细胞对体细胞克隆效率未出现不利影响。

摘要:为了对工程中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞所产人源重组促红素 (rhEPO) 的N-糖基化特点进行考察，静置培养工程细胞后，通过等电聚焦和凝集素共沉淀对培养上清中的rhEPO进行分析，并对无血清培养上清中乳酸脱氢酶 (LDH) 和唾液酸酶活性进行检测，发现这株CHO细胞可以表达唾液酸含量较高的rhEPO蛋白。但是随着培养时间的延长，细胞的存活率逐渐降低，死亡的细胞将胞内的唾液酸酶释放到胞外，唾液酸酶的降解作用会造成N-糖链分枝末端的唾液酸占有率降低，导致rhEPO蛋白糖基化形态的变化。所使用的方法及得到的结果为进一步对工业过程进行分析提供了参考。

摘要:筛选一种高效重组金黄色葡萄球菌蛋白A (SpA) 用于制备抗体纯化亲和介质。首先通过基因操作获得金黄色葡萄球菌蛋白A (SpA) 的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因，将目的基因分别克隆至pET-22b表达载体并转化至大肠杆菌BL21 (DE3) 感受态细胞，获得不同串联个数的Z结构域基因工程菌，经诱导表达和Ni2+亲和层析纯化得到Z结构域单体和二-五串体蛋白。纯化后的目的蛋白偶联至琼脂糖凝胶作为亲和层析介质，对人免疫球蛋白G (IgG) 进行分离纯化。分析比较Z结构域串联体蛋白产量及其偶联的亲和介质对抗体吸附载量的差异。结果表明，构建的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因工程菌能有效表达目的蛋白，制备的凝胶亲和介质可特异性吸附人IgG。增加Z结构域串联数，重组蛋白产量和单位摩尔数多聚体蛋白吸附载量获得提高，其中，重组四串体蛋白产量大 (160 mg/10 g湿菌体)，对抗体的吸附载量高 (34.4 mg人IgG/mL胶)，更适合作为配基用于亲和层析介质的制备。