摘要:胞膜窖 (Caveolae) 是细胞膜内陷形成的一种特殊的脂筏结构，含有丰富的胆固醇和鞘磷脂，并在调节细胞信号转导中发挥重要作用。大量的研究显示，Caveolae标志蛋白窖蛋白 (Caveolins) 在维持caveolae的结构及其功能的调节中发挥重要作用。然而，最近研究发现caveolae的形成同样需要另一类蛋白家族Cavins蛋白家族的参与。此外，Cavins蛋白家族成员之一Cavin-1能够与Caveolins主要成员窖蛋白-1 (Caveolin-1) 相互作用参与调节caveolae的结构和功能。文中将就近年来Cavins与Caveolins的关系及其在调节caveolae中的作用研究进展进行综述。

摘要:动脉粥样硬化是一种病因复杂的血管壁慢性炎症性疾病。动脉粥样硬化及其相关并发症已成为人类死亡的主要原因，然而，其病因和发病机制尚未完全阐明，治疗效果还不满意。目前已经证实，动脉内皮细胞功能发生障碍是动脉粥样硬化的始动过程，内皮细胞功能失调和内皮细胞丢失是动脉粥样硬化症的主要特点；而血管平滑肌细胞的异常增生在动脉粥样硬化的发生发展中也扮演着重要角色。因此，探索有效措施促进有益的内皮细胞再生并抑制平滑肌细胞增生是血管损伤防治的关键。近年来有研究发现，体外输注的间充质干细胞能够向受损部位募集，并进一步分化为内皮细胞，修复损伤血管。然而，也有研究显示体外输注的间充质干细胞还可以分化为血管平滑肌细胞进而在血管局部增生，参与血管再狭窄的发生。文中综述了间充质干细胞输注对动脉粥样硬化发展的最新研究进展，希望为后续开展的用间充质干细胞治疗动脉粥样硬化的研究提供一定的参考。

摘要:肿瘤的发生是一个多种信号网络相互参与调节的复杂过程，随着进程的继续，肿瘤细胞逐渐表现出无限增殖、抵抗凋亡、逃避免疫监督、侵袭与转移以及出现异常的代谢途径等标志性特征。线粒体作为一种独特的细胞器，其在细胞能量代谢、氧自由基生成和细胞凋亡等过程中的作用都与肿瘤细胞的发生密切相关。文中就近年来线粒体功能异常在肿瘤发生、形成中所发挥的作用进行综述。

摘要:真菌诱导子是一类能诱导植物和微生物产生次级代谢产物的活性物质，它一经识别，将通过信号转导途径，引起相关基因表达发生变化，从而调节次级代谢产物合成途径中相关酶的活性，诱导特定次级代谢产物的积累。近年来国内外在真菌诱导子诱导途径及机制方面进行了深入研究，同时在生物工业领域，尤其在发酵工业中的应用也引起了广泛关注。以下结合本实验室的研究工作，重点介绍了真菌诱导子在植物和微生物细胞次级代谢产物合成方面的应用现状、诱导机制和存在的问题及展望。

摘要:锌指核酸酶技术在基因定点修饰中具有效率高和特异性好等特点，并成功应用于数十种生物。目前，该技术是否能应用羊上尚未报道。为了敲除转基因山羊标记基因 (EGFP)，构建了一对针对EGFP外显子上的锌指核酸酶表达载体，将其电转染至转EGFP基因胎儿成纤维细胞中，研究了锌指核酸酶突变EGFP基因的效率和方式，利用基因显微注射单细胞获得获得的转基因 (EGFP) 细胞系作为锌指核酸酶的靶细胞。结果显示，通过锌指核酸酶的突变作用，转染后的细胞发绿色荧光比例下降，测序结果显示在EGFP外显子中插入1个碱基G，导致编码EGFP基因的阅读框改变，从而起到基因突变的作用。结果表明，文中构建的锌指核酸酶对EGFP基因有突变作用，可以为以后获得无标记基因供核细胞进行体细胞核移植生产克隆羊奠定基础。

摘要:为考察β-1,3-葡甘露聚糖酶辅助提取圆红冬孢酵母Rhodosporidium toruloides油脂工艺的应用潜力，以R. toruloides Y4发酵醪液为原料，乙酸乙酯为溶剂，在10 L规模下研究了酶解和萃取条件对油脂提取率的影响，并进行了初步物料平衡分析。结果表明：酶处理0.5 h，油脂提取率可达71.1%，酶解效率与10 mL小体系所取得的结果相当。通过多次萃取，有效缓解了乳化现象对油脂提取的影响。经过3次萃取，油脂提取率、溶剂回收率和总物料回收率分别达92.9%、87.0%和94.2%。酶辅助提取油脂工艺可直接利用油脂发酵醪液，提取率高，对设备要求低，具有很好的工业化应用潜力。

摘要:无锡他汀由洛伐他汀经拟无枝酸菌Amycolatopsis sp. CGMCC1149羟基化而来。为获得该转化过程中的关键酶——羟基化酶，运用简并PCR和SEFA PCR技术，从Amycolatopsis sp. CGMCC1149中克隆获得长度为1 212 bp的新型羟基化酶基因，并实现其在大肠杆菌中表达。BLAST序列分析表明该基因属于细胞色素P450基因超家族，并可编码一个含403氨基酸的蛋白，其分子量为44.8 kDa。二级结构预测结果表明：该蛋白包含有氧结合区、离子对结合区和血红素结合区等P450典型功能区。同时文中利用NADH、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶建立了体外酶催化功能验证系统，首次实现无锡他汀转化底物洛伐他汀的体外羟基化。该结果为具有我国独立知识产权的无锡他汀大规模制备奠定了基础。

摘要:以‘红阳’猕猴桃雌株幼叶为外植体，直接诱导产生不定芽，并对不定芽增殖以及生根体系进行优化，建立了高频再生体系。结果表明，在MS+3.0 mg/L BA+1.0 mg/L NAA培养基中，不定芽诱导率达100％，平均出芽数达18.67个/叶盘；在MS+2.0 mg/L BA+1.0 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3培养基中，增殖率达100％，1~6代不定芽平均繁殖系数达8.63；不定芽在1/2 MS+0.8 mg/L IBA培养基中培养15 d，然后继代至含1/2 MS液体培养基的珍珠岩中培养15 d，生根率达100％，且其根系发育良好；98株试管苗移栽到土壤盆钵中，成活95株，成活率达96.94％。本试验成功建立了红阳猕猴桃叶片高频直接再生体系，该体系诱导产生不定芽周期短，出芽率高，不定芽增殖系数大，生根率高且根系发达，为红阳猕猴桃试管苗的工厂化生产和遗传转化奠定了基础。

摘要:Hespintor是应用抑制消减杂交技术 (SSH) 从肝母细胞瘤细胞系HepG2中筛选得到的一未知功能蛋白，序列分析表明该蛋白属于Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子 (Serine proteinase inhibitor, Serpin) 家族中的一个分泌型新成员，具有与食管癌相关基因2 (Esophageal cancer related gene 2, ECRG2) 高度同源的Serpin基本结构。为了进一步阐明Hespintor的生物学功能，必须得到纯化的Hespintor蛋白。先将Hespintor Kazal结构域编码序列亚克隆至原核表达载体pET-40b(+)，转化至Rosetta (DE3) 表达宿主菌中。经 0.25 mmol/L IPTG，30 ℃诱导5 h获得了分子量约为42 kDa的Hespintor-Kazal重组融合蛋白的优化表达，Western blotting证实了重组蛋白的特异性。Hespintor-Kazal重组融合蛋白以包涵体形式在宿主菌中表达，利用金属螯合亲和层析和阴离子交换层析柱对重组蛋白进行两步纯化。初步的活性鉴定表明，纯化的Hespintor-Kazal重组融合蛋白能特异性抑制胰蛋白酶的水解活性，提示Hespintor具有作为一种新型抗肿瘤药物的潜在开发价值。

摘要:为研究1-磷酸鞘氨醇 (Sphingosine-1-phosphate，S1P) 对脐带间充质干细胞 (Umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs) 和脂肪间充质干细胞 (Adipose derived mesenchymal stem cells，AD-MSCs) 向心肌分化的影响，探索其适宜的作用时间和浓度，将UC-MSCs和AD-MSCs接种到培养板，用添加不同浓度S1P的心肌细胞培养液诱导两种干细胞向心肌分化，诱导时间分为7 d、14 d和28 d。采用免疫荧光染色检测心肌特异性蛋白，α-肌动蛋白 (α-actin)、缝隙连接蛋白 (Connexin-43) 以及肌球蛋白重链 (MYH-6) 的表达，并通过共聚焦显微镜和荧光显微镜进行观察；采用MTT分析细胞的活性；膜片钳检测分化细胞的钙瞬变 (此为心肌细胞的功能性指标)。结果表明，S1P与心肌细胞培养液协同作用，能够促进UC-MSCs和AD-MSCs向心肌细胞的分化。并且，随着S1P浓度的增加，促分化作用增强，但细胞活性降低。S1P在心肌细胞培养液中的适宜作用时间为14 d，适宜作用浓度为0.5 μmol/L。而且联合心肌细胞培养液可以使UC-MSCs和AD-MSCs的心肌分化细胞产生钙瞬变，具有类似心肌细胞的功能性。S1P能够与心肌细胞培养液协同作用，促进UC-MSCs和AD-MSCs的心肌功能性分化。

摘要:以紫外光光刻、硅蚀刻及复制模塑技术制备了聚乳酸 (PLLA) 微柱阵列型拓扑结构基底，考察了SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞在拓扑结构基底上的生长及血管内皮生长因子 (VEGF) 和白细胞介素-8 (IL-8) 的分泌及表达。细胞的形态及铺展采用扫描电子显微图像进行分析，细胞在拓扑结构基底上生长24 h后的VEGF及IL-8分泌量采用ELISA进行检测，VEGF及IL-8在mRNA水平的表达量以实时定量PCR进行评价。实验中成功制备了微柱名义直径为2 μm和4 μm、微柱名义间距为2 μm和7 μm的4种拓扑结构基底。研究发现，SH-SY5Y细胞在2-2 μm (微柱名义直径-名义间距)、4-2 μm、4-7 μm拓扑结构基底上的VEGF和/或IL-8分泌量和表达较之PLLA平面基底上相应值出现上调，而在2-7 μm拓扑结构基底上VEGF及IL-8二者均表现出表达和分泌量大幅度和明显的上调。与在PLLA平面基底上相比，SH-SY5Y细胞在拓扑结构基底上表现出细胞形态 (铺展面积及圆度) 的明显变化，细胞VEGF及IL-8分泌量和表达的上调伴随细胞铺展面积的明显降低。结果表明微柱阵列型拓扑结构是影响SH-SY5Y细胞VEGF、IL-8分泌及表达的重要微环境因素，VEGF和IL-8可能构成SH-SY5Y细胞在拓扑结构基底上生长的重要分泌物标志。

摘要:为了方便细胞穿膜肽R9融合蛋白的可溶性表达及功能上的研究，构建了pSUMO (小分子泛素样修饰蛋白) -R9-EGFP (增强型绿色荧光蛋白) 原核表达载体。分别纯化EGFP及R9-EGFP蛋白后，作用于HepG2，细胞经流式细胞仪及激光共聚焦检测R9细胞穿膜肽的作用效果。实验结果显示在SUMO分子伴侣的作用下，R9-EGFP融合蛋白获得可溶性表达。经流式细胞仪检测，R9细胞穿膜肽可以快速有效的携带目的蛋白进入细胞内部且呈时间、剂量依赖性，大约1.5 h以后荧光强度进入平台期。共聚焦显微镜检测结果表明R9细胞穿膜肽可以有效携带EGFP进入HepG2细胞，并显示主要聚集在细胞浆内。同时体外经肝素抑制实验显示，肝素抑制R9-EGFP穿膜的效率达到50％。这些结果表明，可以利用pSUMO-R9/Ni-NTA表达纯化系统，快速、有效地表达出可溶性多聚精氨酸融合蛋白，同时R9细胞穿膜肽可以有效地携带目的蛋白进入细胞内，为进一步研究多聚精氨酸的穿膜机制提供了基础。

摘要:为了获得带有His、Myc 双标签的SPAG4L蛋白，建立能够稳定表达该蛋白的细胞系，本研究利用PCR技术从人睾丸cDNA中扩增SPAG4L开放阅读框，构建到pcDNA3.1(+)myc-his真核表达载体中进行测序和双酶切验证。将pcDNA3.1/myc-His(-)A/SPAG4L质粒和空白载体分别转染HeLa细胞，G418筛选后建立稳定转染细胞系。用Western blotting和免疫荧光技术对新建立的稳定转染细胞系进行检测。结果表明，成功扩增了SPAG4L基因，构建到pcDNA3.1/myc-His(-)A真核表达载体后，经酶切和测序验证所插入的SPAG4L序列完全正确；pcDNA3.1/myc-His(-)A/SPAG4L转染HeLa细胞后，经G418筛选后建立了稳定转染细胞系。Western blotting检测后发现，新建立的细胞系能够正确表达SPAG4L及其标签蛋白，进一步的免疫荧光实验发现，SPAG4L能够和内质网标签蛋白PDI共定位。研究结果所提供的稳定转染细胞系将为下一步进行免疫共沉淀和pull-down实验提供了有力的工具。

摘要:通过在乙肝病毒核心蛋白钉突部位插入标签蛋白EGFP及小片段多肽，研究各种改造对HBc功能的影响。采用RLIC方法，构建野生型HBc、HBc钉突部位带不同接头的EGFP融合重组体、缩短的EGFP融合重组体，并构建与HBc功能互补的质粒HBV1.1c－，将不同重组体与HBV1.1c－共转染HEK293细胞，通过观察荧光及Southern blotting检测病毒复制中间体，判断相应基因工程改造对重组蛋白中不同结构域功能的影响。RLIC方法可有效地用来进行片段缺失，且缺失片段大小及位置无明显限制。带柔性或刚性接头的重组HBc-EGFP均可产生绿色荧光，但荧光在细胞内分布形态不同，两种重组HBc-EGFP均不能支持正常的HBV复制，各种截短的插入片段以及aa79-80单独缺失体亦不能支持HBV复制。结果表明RLIC方法是一种基因工程改造的有力工具，不同类型接头对重组蛋白的结构和功能有不同影响，aa79-80对维持HBc的主要功能之一——支持HBV复制有重要作用。

摘要:由于乙醇耐性受多基因控制，因此需要从全基因组水平进行改造以期得到高乙醇耐受的突变体。文中分别使用紫外诱变、等离子体诱变及人工转录因子3种方法对工业酿酒酵母Sc4126进行改造，获得了乙醇耐性提高的突变体，并比较了3种方法的正突变率。人工转录因子文库转化的方法获得了最多数量的乙醇耐性突变体，高出紫外诱变和等离子体诱变方法1~2个数量级，且遗传稳定。研究结果表明，人工转录因子技术可以用于对工业酿酒酵母快速进行基因组工程改造。

摘要:麦角甾醇是由酵母菌产生的具有重要经济价值的代谢产物。为了提高酵母菌利用糖蜜发酵生产麦角甾醇的产量，通过响应面分析法优化了发酵培养基配方，并在5 L发酵罐对发酵过程pH控制和底物流加补料方式进行了优化。结果表明，利用优化后的发酵培养基，即糖蜜总糖40 g/L，KH2PO4 1 g/L，K2HPO4 1.86 g/L，CuSO4·5H2O 17.5 mg/L，FeSO4·7H2O 13.9 mg/L，MgSO4·5H2O 12.3 mg/L，玉米浆10 mL/L，麦角甾醇产量比优化前提高了29.5%；利用恒定pH控制策略，在5 L发酵罐进行分批发酵，使麦角甾醇产量提高了62.1%；进一步采用底物流加补料策略，使麦角甾醇产量达到1 953.85 mg/L，是分批发酵的3.2倍，而且麦角甾醇产率比分批发酵提高了42.7%。为酵母菌发酵糖蜜产麦角甾醇的产业化应用奠定了基础。

摘要:利用基因工程大肠杆菌直接从头生物合成脂肪酸乙酯 (生物柴油) 的相关研究引起了国内外研究人员的广泛关注。在本课题组已经构建的能够从头合成脂肪酸乙酯的大肠杆菌菌株KC3的基础上，通过替换表达不同来源的硫酯酶，发现表达来源于香樟树的硫酯酶Cc FatB1基因能够提高脂肪酸乙酯产量。进一步通过共表达Cc FatB1和大肠杆菌硫酯酶tesA’基因，以及启动子优化，获得了高产脂肪酸乙酯工程菌株KC4。KC4菌株在摇瓶条件和发酵条件下的单位生物量脂肪酸乙酯产率分别为21.4 mg/ (L?OD600)和31.16 mg/ (L?OD600)。该工程菌株的构建进一步提高了脂肪酸乙酯产量，显示了通过基因工程改造大肠杆菌从头合成生物柴油的应用潜力。

摘要:以能将去氢表雄酮 (DHEA) 转化为三羟基雄甾烯酮 (7α,15α-diOH-DHEA) 的赤霉菌Gibberella intermedia CA3-1为出发菌株，对其进行了诱变选育及工艺优化，以期提高转化效率。采用0.12 mg/mL亚硝基胍诱变处理赤霉菌孢子悬液30 min，以350 μmol/L酮康唑为最低抑制浓度进行抗性平板筛选，最终获得一株遗传稳定性较好的高产菌株M-10，其产物摩尔得率达到70.2%，为出发菌株的1.2倍。通过摇瓶转化工艺的优化，确定了突变菌株的最适转化工艺。在优化的转化工艺下，当底物DHEA投料浓度为5 g/L时，7α,15α-diOH-DHEA摩尔得率提高到75.6%，较原始菌株提高了31.3%。

摘要:大肠杆菌Escherichia coli AFP111是E. coli NZN111 (△pflAB△ldhA) 的ptsG自发突变株，其转化1 mol的木糖合成丁二酸的过程中净产生1.67 mol ATP，但是转化1 mol的木糖合成丁二酸的过程中实际需要2.67 mol ATP，因此在厌氧条件下，ATP的供给不足导致E. coli AFP111不能代谢木糖。采用常压室温等离子体射流诱变产丁二酸大肠杆菌菌株，在厌氧条件下，利用以木糖为碳源的M9培养基，筛选得到一株可以代谢木糖并积累丁二酸的突变株DC111。该突变菌株在发酵培养基中，72 h内可以消耗10.52 g/L木糖产6.46 g/L的丁二酸，丁二酸的得率达到了0.78 mol/mol。而且突变株中伴有ATP产生的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 (PCK) 途径得到加强，PCK的比酶活相对于出发菌株提高了19.33倍，使得其在厌氧条件下能够有足够的ATP供给来代谢木糖发酵产丁二酸。

摘要:谷氨酸棒状杆菌SA001是缺失了乳酸脱氢酶基因 (ldhA) 的菌株。为了增加厌氧条件下经异柠檬酸到丁二酸的代谢通量，以提高丁二酸的产量。将来自大肠杆菌Escherichia coli K12的异柠檬酸裂解酶基因导入谷氨酸棒状杆菌SA001 (SA001/pXMJ19-aceA) 中。该菌经0.8 mmol/L的IPTG有氧诱导12 h后，转入厌氧发酵16 h，丁二酸的产量为10.38 g/L，丁二酸的生产强度为0.83 g/(L·h)。与出发菌株比较，异柠檬酸裂解酶的酶活提高了5.8倍，丁二酸的产量提高了48%。结果表明过量表达异柠檬酸裂解酶可以增加由乙醛酸途径流向丁二酸的代谢流。

摘要:本文旨在研究阿魏蘑菌体形态与漆酶产量之间的关系。结果显示，玻璃珠的添加可改变发酵过程中菌体形态，漆酶产量在球状菌体条件下高于丝状、絮状菌丝：直径分布在0.2~0.4 mm范围的菌球对漆酶的合成具有明显的促进作用；适合的葡萄糖、玉米粉和麸皮添加量，对直径在0.2~0.4 mm范围的菌球形成具有重要影响。此外，添加惰性载体同样可以控制菌球的直径分布，但对漆酶的合成无促进作用。

摘要:协同应用纤维素酶和木质素酶催化降解废次烟叶，探讨清洁高效的酶解破壁效应及浸提茄尼醇工艺条件。结果发现复配酶催化裂解溶浸茄尼醇效果明显优于单一酶，酶解时间、温度、pH值以及酶投加量等条件均影响酶破壁浸提茄尼醇能效。结果表明，采用纤维素酶：木质素酶酶活比15∶1 (U/U) 的复配酶，在体积为5倍烟草质量的水介质环境中，当复配酶投加量为175 U/g，水浴温度40 ℃，pH为6时，催化酶解烟叶8 h后，茄尼醇溶浸浓度可达0.33 g/L。在此条件下，茄尼醇平均提取率可达96.53％，是化学回流浸提方法的1.68倍。该方法为有效提取废次烟草中茄尼醇提供了一种新途径。

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