摘要:存在于酵母菌细胞表面的絮凝蛋白与邻近细胞表面寡聚甘露糖链相互作用，从而使细胞相互聚集形成细胞团的生理过程称为酵母菌絮凝。编码絮凝蛋白的基因中存在大量衔接重复序列，这些重复序列的变化不但使酵母菌呈现出絮凝特性的多样性，而且由重复序列驱动的基因内或基因间重组使酵母菌的絮凝特性具有非常明显的遗传不稳定性。文中综述了基因内重复序列对酵母菌絮凝特性和遗传稳定性的影响，将为基于序列调控策略改进酵母菌絮凝特性及遗传稳定性奠定理论基础，为絮凝特性在发酵工业或环境修复过程中的可控应用提供新的解决策略

摘要:猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的一种急性、热性和高度接触性传染病。该病呈世界性分布，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。目前，疫苗接种仍然是防控猪瘟的主要手段。虽然传统的猪瘟弱毒疫苗 (如C株) 安全有效，但猪瘟的临床表现发生了很大变化，呈现典型猪瘟和非典型猪瘟共存、隐性感染和持续感染并现，免疫失败的现象时有报道，且不能区分野毒感染和免疫接种。因此，研制安全、高效、能区分野毒感染和疫苗免疫动物 (DIVA) 的新型猪瘟疫苗极为必要。文中就近年来开发的核酸疫苗、病毒活载体疫苗、基于蛋白/肽的疫苗、基因缺失疫苗、嵌合瘟病毒疫苗等新型DIVA猪瘟疫苗作一综述

摘要:钙结合蛋白是日本血吸虫生长发育不可缺少的蛋白，具有非常广泛而重要的功能。在课题组日本血吸虫体被表膜蛋白研究基础上，利用PCR技术克隆了中国大陆株日本血吸虫66 kDa钙结合蛋白 (SjIrV1) 编码基因的cDNA序列，BLAST分析与菲律宾株日本血吸虫SjIrV1 cDNA编码序列一致，荧光定量PCR分析表明该基因在童虫和成虫期不同发育阶段均有表达，其中在35 d和42 d成虫中表达量较高，在42 d雌虫中该基因表达水平远高于42 d雄虫。构建重组表达质粒pET28a (+)-SjIrV1，在大肠杆菌中成功诱导表达，重组蛋白主要以可溶性形式存在，通过高效液相色谱法 (RP-HPLC) 以及串联质谱法 (MS/MS) 鉴定所获蛋白为目的蛋白SjIrV1。蛋白质印迹 (Western blotting) 分析结果显示重组蛋白能被感染日本血吸虫鼠血清和免疫鼠血清所识别，SjIrV1蛋白在虫体各发育阶段中均表达。免疫荧光染色实验观察表明SjIrV1主要分布在日本血吸虫成虫的表膜。应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后，免疫鼠血清中检测到较高水平的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体。结果表明SjIrV1可能在日本血吸虫的生长发育过程中起着重要作用。

摘要:旨在研究3个地方鸡品种 (汶上芦花鸡、莱芜黑鸡、济宁百日鸡) 主要组织相容性复合体 (Major Histocompatibility Complex，MHC) B-LB II基因遗传变异与绵羊红细胞 (Sheep red blood cell，SRBC)、禽流感 (Avian influenza，AI) 和新城疫 (Newcastle disease，ND) 抗体滴度等免疫性状的关系，揭示不同品种间基因变异与免疫性状的相关性。以300只地方品种鸡为材料，运用直接测序和聚合酶链式反应-单链构象多态性 (PCR-SSCP) 等技术检测MHC B-L BII基因的序列变异。在3个地方鸡品种中分别发现了19~22个核苷酸变异位点，可导致其中16~18个氨基酸的变异。3个地方鸡种MHC B-L BII基因中分别有7~8个 (Single nucleotide polymorphism，SNP) 位点与部分免疫性状存在不同程度的显著相关性。变异位点G97A和T138A在3个品种中均存在，与SRBC、ND、AI抗体滴度均显著相关 (P＜0.05)。其中，G97A突变在济宁百日鸡中与ND抗体滴度显著相关 (P＜0.05)，在莱芜黑鸡中与SRBC抗体滴度显著相关 (P＜0.05)，在汶上芦花鸡中与H9抗体滴度显著相关 (P＜0.05)；变异位点T138A在汶上芦花鸡和济宁百日鸡中与H9抗体滴度显著相关 (P＜0.05)。研究表明3个地方鸡种的MHC B-LB II基因遗传变异与免疫性状存在显著关联

摘要:多杀菌素是对农业虫害防治及粮食仓储安全均具有重大意义的农用抗生素。为了深入揭示刺糖多孢菌合成多杀菌素的调控特点，首先通过建立基于报告基因的启动子探测技术，探测了多杀菌素生物合成基因簇的9个启动子活性。并进一步通过荧光定量PCR，分析了这9个基因和不在基因簇内的负责糖基前体供应和鼠李糖合成的4个基因的转录时序，结果表明多杀菌素生物合成基因簇内的9个基因在菌体生长进入稳定期时有较高的转录，这和发酵液中此时开始大量积累多杀菌素一致；同时还发现，簇外的4个与糖基供应相关的基因和基因簇内基因的转录时序不同，它们在菌体生长对数期有较高的转录活性，这暗示多杀菌素聚酮链的合成速率和参与后修饰的糖基底物供应的最优化匹配有可能是提高生物合成多杀菌素的前提和关键

摘要:葡萄糖氧化酶 (GOD) 是一种具有广泛应用前景的工业酶。为了实现葡萄糖氧化酶的高效生产，提高重组毕赤酵母生产GOD的产量和增强生产强度，对重组毕赤酵母诱导阶段的初始菌体浓度和甲醇浓度进行了优化。在此基础上，诱导期采用了双碳源 (甘油、山梨醇和甘露醇) 与甲醇混合流加的模式。研究发现，最佳诱导前初始菌体浓度和甲醇浓度分别为100 g/L和18 g/L，此时GOD产量为427.6 U/mL。在诱导阶段采用甘油、山梨醇和甘露醇与甲醇的混合添加均可以提高GOD产量，其中甘露醇与甲醇的混合流加效果最为显著。当甲醇与甘露醇混合流加的比例为20∶1 (W/W) 时，诱导156 h GOD产量和生产强度分别可达711.3 U/mL和4.60 U/(mL·h)，比甲醇单一流加策略结果分别提高了66.3％和67.9％。此外采用合适的甘露醇混合流加策略不但不会抑制AOX1启动子的表达，甚至有一定促进作用，AOX酶活性为8.8 U/g (对照为5.2 U/g)。双碳源流加方式还能推广到毕赤酵母其他表型中，为该系统高效表达外源蛋白提供一种新策略

摘要:为实现可同时利用木糖和葡萄糖进行生产发酵，以产乙醇的大肠杆菌工程菌SZ470为出发菌株 (?pflB，?frdABCD，?ackA，?ldhA)，采用同源重组技术，敲除葡萄糖转运基因ptsG，以构建不受葡萄糖抑制效应影响的菌株SZ470P。SZ470P在5％混合糖 (2.5％木糖和2.5％葡萄糖) 培养基中能同时利用葡萄糖和木糖进行发酵，葡萄糖消耗量是13 g/L，为对照菌株SZ470的一半；木糖消耗量是20 g/L，是SZ470的3.8倍；乙醇的最高产量为15.01 g/L，转化率为89.13％，比SZ470提高了14.32％。结果表明，工程菌SZ470P可同时利用葡萄糖和木糖发酵生产高产量的乙醇

摘要:为了研究miR-24对于珠蛋白表达的调控作用，并明确其作用机制。首先采用定量PCR的方法确定miR-24在红系分化过程中的表达变化情况，以及miR-24过表达后珠蛋白的表达变化情况。进而通过报告基因实验以及Western blotting的方法确定miR-24的靶基因。通过表型回复实验证明miR-24是否通过靶基因调控珠蛋白的表达。结果发现在hemin诱导的K562细胞以及EPO诱导的造血干/祖细胞向红系分化过程中，miR-24表达上调，在K562细胞中过表达miR-24可以促进红系分化过程中ε-和γ-珠蛋白的表达上调，进一步的研究表明miR-24是通过靶基因Sp1来行使对珠蛋白的调控作用的。以上结果表明miR-24通过负调节其靶基因Sp1促进红系分化过程中珠蛋白的表达上调

摘要:为解决P53蛋白难以进入细胞内部发挥治疗作用的瓶颈难题。将p53基因融合插入带有9个精氨酸作为穿膜肽的表达载体中表达融合蛋白CPPs-P53，并与没有穿膜肽的P53蛋白进行比较，利用Western blotting 方法检测蛋白的表达情况，MTT及Annexin V/PI双染法检测细胞生长抑制率及细胞凋亡率。Western blotting 检测表明已成功在原核表达系统中表达融合蛋白CPPs-P53和P53蛋白，且蛋白纯度均已达到90％以上；MTT检测表明，P53蛋白对肿瘤细胞的生长虽有一定的抑制作用，但融合蛋白CPPs-P53与之相比，对肿瘤细胞生长的抑制效果显著增强，细胞生长抑制率有明显的提升，并且细胞生长抑制率呈现剂量依赖性；Annexin V/PI双染检测细胞凋亡情况也表明P53虽可以在一定程度上诱导肿瘤细胞的凋亡，但与P53蛋白相比较，融合蛋白CPPs-P53诱导的凋亡细胞明显增加，凋亡率是P53蛋白的2~3倍。由此说明在抑制肿瘤细胞的生长和诱导细胞凋亡方面，CPPs-P53比没有穿膜肽的P53蛋白的效果更显著

摘要:11 kDa蛋白作为B19病毒的一个非结构蛋白，可能在病毒复制周期中发挥重要作用。为了研究11?kDa蛋白对细胞内NF-κB信号通路的影响，首先通过原核表达纯化获得GST-11 kDa融合蛋白，并制备免疫血清，利用免疫血清验证了11 kDa蛋白在Hela细胞呈胞浆定位。荧光素酶检测系统发现11 kDa蛋白能上调细胞内NF-κB转录活性，Western blotting进一步表明11 kDa蛋白能够引起细胞内IκB-α的降解。同时，11 kDa蛋白还能够上调细胞内炎性因子IL6启动子的活性，而该反应主要依赖于NF-κB通路。结果表明，11 kDa蛋白通过参与细胞内信号途径激活相关炎性因子的表达

摘要:旨在利用杆状病毒系统表达、制备人视黄醇结合蛋白 (RBP4) 并检测其免疫原性。将人RBP4基因片段及信号肽SS64片段亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-dual (pFBd) 中，获得相应的重组转移质粒；转化大肠杆菌菌株DH10bac，转座后经筛选获得重组穿梭质粒rbacmid，将重组穿梭质粒转染孔板培养的Sf9细胞，获得含人RBP4表达框的重组杆状病毒，经过扩增获得毒种。毒种感染对数生长期的Sf9细胞并表达人RBP4蛋白 (I-RBP4)，通过SDS-PAGE和Western blotting对表达蛋白进行检测和鉴定。用毒种感染悬浮培养的Sf9细胞制备一批RBP4蛋白，完成SDS、Western blotting的检测及少量的多抗制备。纯化重组蛋白并与E.coli重组人RBP4 (E-RBP4) 分别免疫家兔。实验结果，酶切鉴定及测序证实重组转移质粒构建正确；成功构建重组RBP4-bacmid；人RBP4蛋白在昆虫细胞获得高效表达。表达的RBP4蛋白可以分泌到培养基中，分子量约为23 kDa，经过计算表达量为100 mg/L；纯化蛋白免疫兔子制备了多抗血清，血清滴度为1∶100 000，高于原核表达的抗体滴度 (1∶10 000)，与人体提纯蛋白制备的抗体滴度相近。杆状病毒系统高效表达了人的RBP4蛋白，具有较好的抗原性，并获得高亲和力的抗血清，为下一步的人血RBP4检测试剂盒的制备打下了坚实的基础

摘要:利用质膜钙离子通道抑制剂LaCl3、异搏定 (Verapamil，VP)，钙离子载体A23187，内膜系统钙离子通道抑制剂2-APB和LiCl处理，研究水杨酸 (SA) 诱发的丹参培养细胞内Ca2+迸发在培养基碱化过程中的作用。结果显示：SA处理诱发丹参培养细胞培养基碱化，质膜钙离子通道抑制剂LaCl3和VP、内膜系统钙离子通道抑制剂2-APB和LiCl单独处理均可显著抑制SA处理诱发的培养基碱化过程，但质膜钙离子通道抑制剂对SA处理诱发的培养基碱化的抑制作用要显著强于内膜系统钙离子通道抑制剂；当两类钙离子通道抑制剂同时使用，培养基碱化过程被完全抑制，甚至培养基出现酸化趋势；钙离子载体A23187可以显著促进培养基碱化过程。以上结果说明，由水杨酸诱发的胞外Ca2+内流与胞内钙库Ca2+释放均参与了丹参培养基碱化的诱导过程，但胞外Ca2+内流的作用更重要。本研究揭示了SA诱发的Ca2+与丹参细胞培养基碱化之间的关系，为更深层次地阐明植物次生代谢调控机制提供理论基础

摘要:PARP1是动物细胞内的一种重要的DNA修复酶。近几年PARP1作为新型的抗癌靶点，受到广泛的关注。为了获得高活性的PARP1，首先将hPARP1基因克隆到载体pFastBacTM1中，构建转移载体pFast-hPARP1；然后转化大肠杆菌Escherichia coli DH10Bac感受态细胞中。其次，通过位点特异性转座，将hPARP1基因整合到Bacmid穿梭载体中，构建表达质粒Bacmid-hPARP1。最后，通过脂质体将表达质粒转染Sf9昆虫细胞。Western blotting和酶活测定法对hPARP1的表达和活性进行分析。采用3-氨基苯甲酰胺亲和层析柱对收获的昆虫细胞中表达的hPARP1酶进行纯化。Western blotting结果表明在昆虫细胞中hPARP1酶表达成功。经3-氨基苯甲酰胺亲和层析柱纯化后，Sf9昆虫细胞表达出的hPARP1酶的比活由0.051 nmol/(min?μg) 提高到了1.988?nmol/(min·μg)，而且每100 mL的细胞中能够收获约3.2 mg酶。实验结果为PARP1大规模生产和应用提供了可参考利用的技术

摘要:慢病毒载体作为一种有效的生物研究和基因治疗载体，近年来正受到广泛关注，而转录通读现象则是限制其被使用的主要生物安全性瓶颈之一。为了评估慢病毒载体在整合入染色体后的转录通读的实际情况，需要建立一种有效的检测转录通读率的方法。文中运用分子生物学等手段，将相关质粒瞬时转染入293T细胞，模拟野生型和自灭活型慢病毒载体整合入染色体后的情况，利用实时荧光定量PCR分别定量转录通读和总转录本在慢病毒载体上的特征序列，并计算出转录通读率；同时使用流式细胞计数等技术，检测转录通读后的GFP蛋白产物。两种检测结果均与理论相符，即自灭活型载体具有更高的转录通读率。说明文中所建立的方法有效可靠，为进一步评估和降低慢病毒载体的转录通读率，提高慢病毒载体的生物安全性的研究提供技术支持

摘要:用我们建立的活细胞miRNA活性谱检测技术测定BHK21、HEK293和Vero三种肾来源细胞系中58种miRNA活性谱，发现miR-206在BHK21细胞中具有特征性高活性。鉴于miR-206是典型的横纹肌特征性miRNA，进一步以小鼠成肌细胞C2C12及人胚肾细胞HEK293为对照，检测了BHK21细胞中miR-206的活性及表达水平。之后，用马血清诱导培养BHK21细胞，检测诱导前后BHK21细胞中骨骼肌肌球蛋白重链 (Slow skeletal myosin heavy chain，MHC) 表达情况，miR-206活性和表达水平以及受miR-206负调控的Connexin43(Cx43) 的表达水平。结果发现，miR-206在BHK21细胞中活性和表达水平都明显高于C2C12细胞；马血清诱导后，BHK21细胞中MHC表达水平升高，miR-206活性和表达水平都升高，而Cx43表达水平下降。结果提示BHK21细胞具有成肌细胞特性。本研究首次发现BHK21细胞中miR-206的高活性，从miRNA角度证实了BHK21细胞来源于肾间质细胞，而不是肾实质细胞。研究结果还提示BHK21细胞有可能作为一种体外模型用于miR-206的功能研究

摘要:展示酶的酵母细胞既具有固定化酶的优点，又有制备简单、成本较低的特点。采用表面展示南极假丝酵母脂肪酶B (Candida antarctica lipase B，CALB) 的毕赤酵母细胞催化合成己二酸二异辛酯 (Diisooctyl adipate，DIOA)，对该反应体系进行优化，并实现了初步工艺放大制备。经条件优化后，在10 mL反应体系中，DIOA的产率可达85.0％。该工艺放大到200 mL反应体系时，DIOA产率可达97.8％。经减压蒸馏，DIOA纯度可达到98.2％。该酵母表面展示脂肪酶在合成绿色润滑油己二酸二异辛酯中具有良好应用前景

摘要:

摘要: