摘要:为了研发出一种可同时预防猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)和猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)两种病毒病的有效二联亚单位疫苗，本研究将PDCoV的受体结合域(receptor binding domain, RBD)与PEDV的RBD基因进行串联，构建至真核表达载体pCDNA3.1(+)中，利用哺乳动物细胞ExpiCHOTM表达系统表达纯化出PDCoV-RBD-PEDV-RBD (简写为pdRBD-peRBD)融合蛋白，以3种不同剂量(10、20和30 μg)免疫小鼠，利用ELISA和流式细胞术评估该融合蛋白诱导的体液免疫反应和细胞免疫反应，利用病毒微量中和试验测定免疫小鼠血清对PDCoV或PEDV的中和效价。结果表明，3个不同剂量组在加强免疫后均诱发了高水平的IgG抗体，不同剂量组间抗体水平没有明显差异，说明10 μg的免疫剂量即可达到较好免疫效果。流式细胞术检测结果显示，免疫组的CD3+CD4+ T细胞比例显著升高，CD3+CD8+ T细胞比例相对较低，这符合亚单位疫苗主导机体产生体液免疫反应的预期。同时，对血清中细胞因子白细胞介素-2 (interleukin-2, IL-2)、白细胞介素-4 (interleukin-4, IL-4)和干扰素-γ (interferon-γ, IFN-γ)的含量进行了检测，结果表明该融合蛋白诱导了良好的体液免疫效果，同时还产生了一定的细胞免疫应答。中和试验结果表明，10 μg免疫剂量所诱导的抗体即可在体外有效中和PDCoV和PEDV两种病毒，效价分别为1:179.25和1:141.21。上述研究结果表明，pdRBD-peRBD融合蛋白10 μg免疫剂量即可诱导高水平的体液免疫反应，诱导的抗体可同时中和PDCoV和PEDV两种病毒，说明pdRBD-peRBD融合蛋白有希望成为一种能同时预防PDCoV和PEDV的有效二联亚单位疫苗。