摘要:为研究猪圆环病毒2型 (Porcine circovirus type 2，PCV2) 感染的猪肺泡巨噬细胞 (Porcine alveolar macrophages，PAMs) 分泌Ⅰ型干扰素信号通路，以PCV2病毒感染PAMs为研究对象，采用酶联免疫吸附测定 (Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)、实时荧光定量PCR和Western blotting，分析PCV2感染对PAMsⅠ型干扰素的诱导、cGAS/STING信号通路相关基因mRNA和蛋白表达的影响，并应用靶向cGAS和STING特异性siRNA、抑制剂BX795和BAY 11-7082，解析cGAS、STING、TBK1和NF-κB/P65在PAMs生成Ⅰ型干扰素中的作用。结果显示，PAMs感染PCV2病毒48 h后Ⅰ型干扰素的表达量显著升高 (P＜0.05)，cGAS mRNA的表达量在感染48 h和72 h后显著升高 (P＜0.01)，STING mRNA表达量在PCV2感染72 h后显著上升 (P＜0.01)，TBK1 mRNA、IRF3 mRNA感染48 h后显著升高 (P＜0.01)。PCV2能够显著升高PAMs胞浆STING、TBK1和IRF3蛋白含量，降低胞浆NF-κB/p65的含量，促进NF-κB/p65和IRF3入核。敲低PAMs中cGAS或STING表达水平后，PCV2感染PAMs 48 h后，Ⅰ型干扰素的表达水平显著下降 (P＜0.01)；BAX795抑制TBK1后，PCV2感染PAMs 48 hⅠ型干扰素的表达水平显著下降 (P＜0.01)，BAY 11-7082 抑制NF-κB/P65表达后，PCV2感染PAMs 48 h I型干扰素的表达量与PCV2组相比无显著性差异 (P＞0.05)。结果表明，PAMs感染PCV2后通过cGAS/STING/TBK1/IRF3信号通路诱导Ⅰ型干扰素分泌。

摘要:为研究miR-125a-5p在猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)诱导淋巴细胞凋亡中的作用及其作用机制，以PCV2感染PK-15细胞外泌体孵育的淋巴细胞为研究对象，采用流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光定量PCR，检测淋巴细胞凋亡率及凋亡相关miRNA表达；合成miR-125a-5p模拟物和抑制物转染PK-15细胞，检测miR-125a-5p过表达或抑制表达后细胞凋亡率；采用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因，双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p对靶基因的调控；Western blotting检测外泌体孵育淋巴细胞的线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3的表达。结果显示，感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体极显著提高淋巴细胞凋亡率，在一定浓度范围内呈剂量依赖性；与PCV2诱导细胞凋亡相关的miRNA中，miR-125a-5p表达量极显著升高，miR-125a-5p模拟物转染细胞后极显著提高细胞凋亡率；利用TargetScan预测发现，miR-125a-5p与Bcl-2 3UTR区有结合位点，miR-125a-5p模拟物极显著抑制pmir-Bcl-2 3UTR-WT荧光素酶活性，对pmir-Bcl-2 3UTR-MuT的荧光素酶活性无明显改变；外泌体孵育的淋巴细胞Bcl-2表达量显著降低，Bax、细胞色素C的释放和caspase-3表达量显著升高，Bcl-2/Bax的比值极显著降低。这表明，PCV2通过外泌体诱导淋巴细胞上调miR-125a-5p的表达，进而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白表达，激活淋巴细胞线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。

摘要:为探究糖酵解对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)在猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages, PAMs)中复制的作用，以PRRSV感染PAMs为研究对象，采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、实时荧光定量PCR、病毒滴度测定和蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测PAMs感染PRRSV后糖代谢的变化，PRRSV蛋白和病毒滴度及细胞相关基因和蛋白的表达水平；并应用靶向低氧诱导因子-1 (hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)特异性siRNA分析HIF-1α在病毒复制中的作用。结果显示，PRRSV感染增强PAMs糖酵解，上清液葡萄糖摄取和乳酸含量显著升高(P<0.05或0.01)，细胞内ATP显著降低(P<0.05)，己糖激酶2 (hexokinase 2, HK2)、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3 (6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3, PFKFB3)和丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase isozyme type M2, PKM2)含量显著升高(P<0.05或0.01)；抑制糖酵解会显著降低PRRSV蛋白表达和病毒滴度(P<0.01)；特异性siRNA敲低HIF-1α的表达后，糖酵解和PRRSV滴度显著降低(P<0.05)；抑制糖酵解过程后逆转了PRRSV抑制干扰素信号通路。本研究为探索糖酵解在PRRSV复制过程中的功能提供了理论支持。